Molbiol.ru | О проекте | Справочник | Методы | Растворы | Расчёты | Литература | Орг.вопросы Web | Фирмы | Coffee break | Картинки | Работы и услуги | Биржа труда | Zbio-wiki NG SEQUENCING · ЖИЗНЬ РАСТЕНИЙ · БИОХИМИЯ · ГОРОДСКИЕ КОМАРЫ · А.А.ЛЮБИЩЕВ · ЗООМУЗЕЙ Темы за 24 часа [ Вход* | Регистрация* ] Форум: | |
Forum robot Постоянный участник на сервере в Москве |
|
мух IP-штамп: frW0uqO/N5.7k гость |
|
мух IP-штамп: frW0uqO/N5.7k гость |
|
Гость IP-штамп: frQJx3mR5SbdU гость |
1. Поместить одну-несколько мух (можно - любые другие организмы, которые можно легко растереть пестиком в пробирке; спиртованный материал - предварительно подсушить) и залить 200 мкл "рабочего раствора". 2. Гомогенизировать содержимое пробирки. 3. Инкубировать при 65 град. 30 мин. 4. Добавить 300 мкл 5М/3М Ацетата калия (3М ацетата калия + 2М - уксусной кислоты). Перемешать. 5. Инкубировавть на льду 30 мин. 6. Перемешать; центрифугировать 10 мин при 13 тыс об/мин. 7. Перенести супернетант в новую пробирку. 8. Добавить равный объём 96% этанола (500 мкл). 9. Перемешать. Оставить на столе на 5-10 мин. 10. Центрифугировать 10 мин 13 тыс об/мин. 11. Удалить супернатант. Добавить 96% этанол (400 мкл). 12. Перемешать, так, чтобы осадок не при этом не оказался прилипшим к части пробирки не смачиваемой спиртом. Оставить на столе на 3-5 мин 13. Центрифугировать 3-5 мин при 13 тыс об/мин. 14. Тщательно отобрать спирт. 15. Подсушить осадок в пробирках, оставив их открытыми в микротермостате при 37 град не менее 20 мин. 16. Растворить в 50 мкл воды. При таком выделении ДНК может существенно (для ПЦР) деградировать при хранении более 6 мес при 4 град. |
« Предыдущая тема · Молекулярная и клеточная биология · Следующая тема » |