Molbiol.ru | О проекте | Справочник | Методы | Растворы | Расчёты | Литература | Орг.вопросы Web | Фирмы | Coffee break | Картинки | Работы и услуги | Биржа труда | Zbio-wiki NG SEQUENCING · ЖИЗНЬ РАСТЕНИЙ · БИОХИМИЯ · ГОРОДСКИЕ КОМАРЫ · А.А.ЛЮБИЩЕВ · ЗООМУЗЕЙ Темы за 24 часа [ Вход* | Регистрация* ] Форум: | |
DK. Постоянный участник |
(Tom1 @ 03.07.2011 02:38) - да, буферы "компанейские", pH в геле вроде бы пониже, чем в трис-глицине (хотя для меня это вряд ли критично) бежит быстрее... но этих фирм множество сейчас: пока рассматривал Bio-Rad, Invitrogen и Lonza, наверняка это "не полный список" - и не хочется тратить денюжку, да и время, на выяснение - кто лучше. Тем более, не исключено, что "из одной бочки льют"...
|
Tom1 Постоянный участник |
Лонза и врад примерно одинаковы, но лонза в юсах подороже будет. гы-гы))))
|
DK. Постоянный участник |
(Tom1 @ 03.07.2011 18:56) - и именно инвитро у нас самый дорогой из всех трех .Tom1, а Q-dot вместо ЕСL, случаем, не пробовали? По описанию выглядит заманчиво, я попробовал - свечение есть,где надо, но чтобы добиться наилучшего результата, УФ-освещение должно быть сверху ( как у старых камер, где ТСХ смотрели ), и система регистрации требует изменений -вот и раздумываю, стоит ли связываться, не слишком ли я резво "догоняю прогресс" |
Tom1 Постоянный участник |
|
DK. Постоянный участник |
(Tom1 @ 04.07.2011 00:26) - у меня скорее "возникло любопытство", когда предложили "безвозмездно, т.е. задаром" попробовать: свечение яркое, не выгорает долго. Но та картинка, которую получил на УФ-иллюминаторе для этидиумбромидных гелей, была не лучше ECL. Дальше надо было усовершенствовать регистирирующую технику - но изменился проект, и я так и остался в неведении - стоит ли игра свеч.
|
DK. Постоянный участник |
|
guest: ммм IP-штамп: frQlBxj4iQSg. гость |
|
Tom1 Постоянный участник |
однако в обоих случаях предпочитаю делать это после блокировки, лутше БСА.
|
DK. Постоянный участник |
|
guest: ммм IP-штамп: frQlBxj4iQSg. гость |
|
DK. Постоянный участник |
(guest: ммм @ 22.10.2011 17:21) - А маркер (понятно, не водорастворимый), не слезает при проявке?у нас в Ин-те для проявки пленок используется кодаковская машина: попробую - надеюсь, не перепачкаю машину
|
DK. Постоянный участник |
|
guest: ммм IP-штамп: frQlBxj4iQSg. гость |
Да! Обычный маркер для надписей на стекле и пластике. Не слезет -не собьется при закрывании кассеты и т.п. Один кусочек малярной липкой бумажной ленты и у вас уже ничего не собьется.
|
DK. Постоянный участник |
(guest: ммм @ 23.10.2011 07:24) - обижаете , зачем же из-за одной! одной пленкой и мне-то ограничиться не удается, а там гоняет весь Институт. Буржуи и подсчитали, ч то технологичнее и дешевле выделить одну фотокомнату и поставить одну машину, чем каждой из дюжины лаботаторий выделять площадь на свою фотокомнату и заводить свое, хоть и простенькое, но свое, оборудование и реагенты. Так что машина трудится, "не покладая мотора", до позднего вечера - другое дело, что туда поздно вечером только и прорвешься ...Сейчас подумываем- не лучше ли купить люминесцентный "имидж-анализатор", чтобы обходиться без пленки и сразу, если нужно, обсчитывать интенсивности. Правда, доверия у меня к этим интенсивностям... но как "картинка", видимо, не хуже пленки. Есть какая-то "экспертная оценка" таких камер? |
guest: ммм IP-штамп: frQlBxj4iQSg. гость |
|
Serpent Постоянный участник RU-->IT |
|
Tom1 Постоянный участник |
|
DK. Постоянный участник |
(Serpent @ 24.10.2011 16:20) -у нас собираются покупать LAS-4010 (GE Life Sciences), вроде практически то же самое. Жаль, эпи- УФ еще нет там, для флюоресценции на блотах или ТСХ: но это уже другой класс прибора, охлаждения требует.
|
DK. Постоянный участник |
(Tom1 @ 24.10.2011 16:42) -а что с флюоресцентной лентой делать - ее же еще и возбуждать ? Наверно, люминесцентной?Не, чернилами не претит - просто если писать чернилами, то хочется ближе к "первоисточнику: НЦ мембране." Например, наносят в углы точку "Night Light" - такая суспензия в сосуде с носиком, чтобы разрисовывать всякое разное (вроде стен и потолков) люминесцирующими изображениями. Вот и вспомнил "слухи", что существует что-то типа такого карандаша - для блотов. Сообщение было отредактировано DK. - 25.10.2011 21:02 |
DK. Постоянный участник |
|
Serpent Постоянный участник RU-->IT |
(DK. @ 10.11.2011 08:36) Знает или хоть догадывается кто-нибудь, что за "зверь" NuPAGE antioxidant от Invitrogen? - который нужно вносить не только в образец, но и в верхний буфер. По "аромату" не ДТТ и не меркаптоэтанол... Может, TCEP? |
Tom1 Постоянный участник |
|
bee1 Постоянный участник |
|
bee1 Постоянный участник |
работают прекрасно , но "подсаживают" источник питания 160 в0лт нужно поболее ампер |
DK. Постоянный участник |
(Serpent @ 10.11.2011 16:37) - да вроде если мне память и нюх не изменяют, ТСЕР практически без запаха, а этот... денатуратом, что ли, попахивает.Пишут,что он мигрирует с белками - но зачем-то его добавляют и в верхний буфер, а не только в сампл - буфер. Несовместим с"химией" других гелей, да еще " proprietary". Правда, Кайяджен свой раствор бетаина тоже так загадочно назвал "раствор Ку" - может, и здесь такой же proprietary... |
bee1 Постоянный участник |
(DK. @ 11.11.2011 01:20) - да вроде если мне память и нюх не изменяют, ТСЕР практически без запаха, а этот... денатуратом, что ли, попахивает. Пишут,что он мигрирует с белками - но зачем-то его добавляют и в верхний буфер, а не только в сампл - буфер. Несовместим с"химией" других гелей, да еще " проприетары". Правда, Кайяджен свой раствор бетаина тоже так загадочно назвал "раствор Ку" - может, и здесь такой же проприетары... в кассетах Генерального Електрикса тока был преран - 15 минут - ты что - до сих пор вертикали ставишь ? |
DK. Постоянный участник |
(bee1 @ 11.11.2011 01:53) в кассетах Генерального Електрикса тока был преран - 15 минут - ты что - до сих пор вертикали ставишь ? -ага, от добра добра не ищут. Вряд ли в в горизонтали ТСЕР пахнет иначе . Или лучше совместим с "химией". Мой вопрос, что у них нам за зверь , а не по какому - вертикальному или горизонтальному треку ему бегать.(bee1 @ 10.11.2011 19:21) попробовал горизонтальные кассеты Генерального Електрика для вестерна - ну и что: у Био-рада 200 вольт полчаса, току все равно, горизонтально или как работают прекрасно , но "подсаживают" источник питания 160 в0лт нужно поболее ампер Сообщение было отредактировано DK. - 11.11.2011 10:03 |
DK. Постоянный участник |
|
DK. Постоянный участник |
А вот все три антитела от ENZO работают с первой же попытки- никакой оптимизации не потребовалось. Хорошо бы знать текущее положение дел, кто "не совсем добросовестные производители"... или тем более совсем не. |
bee1 Постоянный участник |
(DK. @ 23.11.2011 22:57) Есть здесь у нас "черный лист" компаний, у кого не стоит покупать первичные антитела? давненько не приходилось блоттинг ставить, память "девичья", да и качество работы компаний со временем меняется - а сейчас обнаружилось, что от Санта Круз одно моноклональное антитело работает очень прилично, а другое, к тому же самому антигену, но другому эритопу не узнает положительный контроль не только в 5% молоке (как рекомендовано производителем), но и просто в Т-ТВС с всего-то 0.05% твином. Хотя ожидался бы огромный фон - но его нет, и на том спасибо . А вот все три антитела от ЕНЗО работают с первой же попытки- никакой оптимизации не потребовалось. Хорошо бы знать текущее положение дел, кто "не совсем добросовестные производители"... или тем более совсем не. мнеб твои проблемы попробуй найди антитела для хроматин иммуноприципитации (ЧиП) |
bee1 Постоянный участник |
(DK. @ 23.11.2011 22:57) Есть здесь у нас "черный лист" компаний, у кого не стоит покупать первичные антитела? давненько не приходилось блоттинг ставить, память "девичья", да и качество работы компаний со временем меняется - а сейчас обнаружилось, что от Санта Круз одно моноклональное антитело работает очень прилично, а другое, к тому же самому антигену, но другому эритопу не узнает положительный контроль не только в 5% молоке (как рекомендовано производителем), но и просто в Т-ТВС с всего-то 0.05% твином. Хотя ожидался бы огромный фон - но его нет, и на том спасибо . А вот все три антитела от ЕНЗО работают с первой же попытки- никакой оптимизации не потребовалось. Хорошо бы знать текущее положение дел, кто "не совсем добросовестные производители"... или тем более совсем не. антитела , которые не работают на вестерне - это вроде байки едак 20-летней давности |
DK. Постоянный участник |
(bee1 @ 23.11.2011 21:55) - если "вроде", то "таки да". И что за страсть у насекомого -во всех темах "отметиться", воображая себя четвероногим на выгуле... Что до иммунопреципитации хроматина - антитела anti- acetyl-H3 и anti- acetyl-H4 от Upstate Biotechnology работали у нас вполне достойно, и точно менее 20 лет тому назад .Можно внести в положительный список - если они все еще существуют. Сейчас ActiveMotif эту грядку окучивает. Сообщение было отредактировано DK. - 24.11.2011 10:45 |
dariakha |
|
guest: ммм IP-штамп: frwHRv5zEzGDY гость |
|
dariakha |
(guest: ммм @ 05.03.2012 16:42) Мы не пользуемся ECL+. А в других случаях подходит любая высокочувствительная(медицинская) рентген пленка с чувствительность 700-1500р-1 Кодак(Дюпон), Сеа(АГФА) РЕНТ(Восточная германия) и Даже ТАСМА и СВЕМА Большое спасибо! А чем вы проявляете блот? |
guest: ммм IP-штамп: frQlBxj4iQSg. гость |
Люминол/пара-кумаровая кислота - это обычный ECL. |
dariakha |
(guest: ммм @ 11.03.2012 13:53) Еще раз спасибо! А у меня еще вопрос: не подскажете пропись проявителя и закрепителя для пленки? Или посоветуете, какие купить готовые? Я нашла несколько прописей проявителя и закрепителя, но не знаю, какие лучше использовать - собираюсь использовать ЕСL кит в первый раз. |
guest: ммм IP-штамп: frQlBxj4iQSg. гость |
Для проявителя нужен метол, гидрохинон, сульфит натрия, сода кальценированная, бромистый калий. У вас все это есть в наличии? Если вам знакомы прописи проявителя Д19 или Р-2 то они оба подходят, фиксаж может быть любой. |
dariakha |
(guest: ммм @ 11.03.2012 22:06) Купите любой готовый проявитель и фиксаж от кодака для рентген пленки. Для проявителя нужен метол, гидрохинон, сульфит натрия, сода кальценированная, бромистый калий. У вас все это есть в наличии? Если вам знакомы прописи проявителя Д19 или Р-2 то они оба подходят, фиксаж может быть любой. Спасибо! |
Umo4ka |
|
guest: ммм IP-штамп: frQlBxj4iQSg. гость |
С белыми бандами у комдива Чапаева разговор короткий. |
Umo4ka |
АК - это антитело ( Antikörper). Банд - это полоска такая на мембране, там где белок сидит двумя антителами распознанный.... |
chambermaid |
|
guest: ммм IP-штамп: frQlBxj4iQSg. гость |
2)Ваши антитела первые или вторые не видят антигена(возможно что его и нет на самом деле) 3) высокий уровень неспецифики. |
marys Участник |
|
guest: ммм IP-штамп: frQlBxj4iQSg. гость |
А вы не путаете ИФА и Western? Боюсь лимонка навредить может. Может ссылку дадите откуда дрова. Нафиг ее стабилизировать под сканер и все дела. Неделю она точно держится. |
Atfatra |
Подскажите, кто как обрабатывает статистически изображения блотов. Интересует именно момент "получения циферки". Дальше все понятно. Я пытаюсь делать это в ImageJ, но у меня возникают немалые сложности. 1) Самое неприятное, я не могу добиться статистически значимых результатов на блоте, который "глазами" кажется явно имеет различия в количестве белка на дорожке. Сразу оговорюсь, разница все-таки не в десятки раз, но на ощутимое количество прцентов (на глаз, конечно). На показательно чистом и красивом блоте это было бы не сложно, но где же его взять... 2) Смущает субъективность, которую так или иначе вносишь при ручной обработке каждой дорожки. Хотя, как следует из пункта 1) пока она мне не грозит - я даже при желании "честно" не могу добиться нужного мне результата. В общем, прошу совета кто чем пользуется, какими функциями обработки итп итд, вдруг я чего-то еще не пробовал Спасибо Добавлено: Согласен, надо было описать чуть корректней. На одном блоте есть по 4-6 образцов одного типа и столько же второго. Хочется получить "число" интенсивности для каждого и сравнить две группы на стат разницу. Пероксидаза --> рентгеновская пленка --> обычный сканер Сообщение было отредактировано Atfatra - 24.04.2014 12:13 |
guest: ммм IP-штамп: frQlBxj4iQSg. гость |
|
Shalty |
|
MMM Постоянный участник |
Если у вас ничего не менялось, а резльтаты поменялись, то это значит, что у вас есть баг, но вы его не видите. При таком подходе невозможно его найти без тщательного расследовния. |
« Предыдущая тема · Молекулярная и клеточная биология · Следующая тема » |