Полная версия страницы  English  

Анализ кинетической кривой реал-тайм ПЦР

Allysy, 15.10.2007 07:55
Добрый день.
Очень хотелось бы узнать мнение биохимиков можно ли анализировать кинетическую кривую полученную при реал-тайм ПЦР для определения Км и Vmax? (ну хотя бы в сравнительном аспекте)
Линеаризовать, определить тангенс угла наклона и пересечение с ОУ??
Если нет, то в чем причина?

Заранее большое спасибо всем кто ответит smile.gif
Guest, 15.10.2007 15:50
Нет.
Наводку даю - посмотри что по осям откладывается (в учебнике и твоем случае).
guest: allysy , 16.10.2007 07:42
Там написано следующее:
«Применение интегральной формы уравнения скорости для анализа ферментативных реакций
Интегральный анализ кинетики действия ферментов

Если в распоряжении экспериментатора имеется полная кинетическая кривая, более удобным методом обработки ……. вместо абсолютных значений параметров реакции используются относительные (D)…..»
В качестве примера рассматривается кинетическая кривая накопление продукта реакции
На оси ОУ откладывается величина которая может соответствовать различным хар-кам системы которые удобны для прямого измерения (в т.ч. оптическая плотность).

P= a (D - D0), а –переходный коэффициент? P - продукта концентрация
D1, D2 – значения измеряемого показателя (отчего нельзя взять флуоресценцию?)
В момент времени Т1, Т2 (различаются на дельту все как положено)

Построение графика (линеаризация) идет в координатах:
(D1-D2); (ln (D∞ - D2/ D∞ - D1))

Km/a – тангенс угла наклона
Vmax/a – пересечение с ОУ

Приблизительно так.
Guest, 16.10.2007 13:45
(Allysy @ 15.10.2007 07:55)
Ссылка на исходное сообщение  Добрый день.
Очень хотелось бы узнать мнение биохимиков можно ли анализировать кинетическую кривую полученную при реал-тайм ПЦР для определения Км и Vmax? (ну хотя бы в сравнительном аспекте)
Линеаризовать, определить тангенс угла наклона и пересечение с ОУ??
Если нет, то в чем причина?

Заранее большое спасибо всем кто ответит smile.gif




All: 1

Review: 0
[Click to change filter selection through My NCBI.]


1: Comput Biol Chem. 2004 Jul;28(3):195-209.Click here to read Links
Principles of rapid polymerase chain reactions: mathematical modeling and experimental verification.
Whitney SE, Sudhir A, Nelson RM, Viljoen HJ.

Department of Chemical Engineering, University of Nebraska, Lincoln, NE 68588, USA.

Polymerase chain reaction (PCR) is an important diagnostic tool for the amplification of DNA. The PCR process can be treated as a problem in biochemical engineering. This study focuses on the development of a mathematical model of the polymerase chain reaction. The PCR process consists of three steps: denaturation of target DNA, annealing of sequence-specific oligonucleotide primers and the enzyme-catalyzed elongation of the annealed complex (primer:DNA:polymerase). The denaturation step separates the double strands of DNA; this model assumes denaturation is complete. The annealing step describes the formation of a primer-fragment complex followed by the attachment of the polymerase to form a ternary complex. This step is complicated by competitive annealing between primers and incomplete fragments including primer-primer reactions. The elongation step is modeled by a stochastic method. Species that compete during the elongation step are deoxynucleotide triphosphates dCTP, dATP, dTTP, dGTP, dUTP, and pyrophosphate. Thermal deamination of dCTP to form dUTP is included in the model. The probability for a species to arrive at the active site is based on its molar fraction. The number of random insertion events depends on the average processing speed of the polymerase and the elongation time of the simulation. The numerical stochastic experiment is repeated a sufficient number of times to construct a probability density distribution (PDF). The moment of the PDF and the annealing step products provide the product distribution at the end of the elongation step. The overall yield is compared to six experimental values of the yield. In all cases the comparisons are very good.

PMID: 15261150 [PubMed - indexed for MEDLINE]

All: 1

Review: 0
[Click to change filter selection through My NCBI.]


1: J Comput Biol. 1996 Summer;3(2):235-51.Links
The effects of nested primer binding sites on the reproducibility of PCR: mathematical modeling and computer simulation studies.
Schierwater B, Metzler D, Krüger K, Streit B.

Department of Biology, Goethe-Universität, Frankfurt, Germany.

The polymerase chain reaction (PCR) has become an indispensable tool in modern biological research. Although the application of PCR is a standard routine, we widely lack a theoretical understanding of the dynamic processes involved, especially with respect to the amplification of nonreproducible and/or unexpected amplification products. For one potential source of uncertainty, the presence of nested primer binding sites within an amplifyable DNA locus, we consider a simple stochastic model for the dynamics of PCR amplification of competing products. For commonly used thermostable DNA polymerases lacking a 5'-3'-exonuclease activity, we predict the relative amplification frequencies of competing PCR products dependent on the primer binding probability, the number of PCR cycles, and the number of initial DNA template molecules. At low primer binding probabilities and low numbers of initial DNA template molecules and PCR cycles, we expect the amplification of two products. At high primer binding probabilities and/or high copy numbers of initial template molecules only one main amplification product is predicted at increasing cycle numbers. Furthermore, by means of computer simulation studies we quantify the stochastic variation for the amplification frequencies of competing products.

PMID: 8811485 [PubMed - indexed for MEDLINE]


http://www.biophysj.org/cgi/reprint/71/1/101
Yuri K, 16.10.2007 16:34
(Guest @ 16.10.2007 13:58)

What the Hell are you talking about?!

Before you copy-pasted half of fucking PubMed, please stop for a second and use your bloody brain. Kinetics of PCR ARE NOT enzyme kinetics as described by Michaelis-Menten equation, because PCR is an artificial cycling process, not an enzyme-catalyzed reaction in isolation. Therefore, kinetics of PCR, be it real-time or end-point measurements, CAN NOT be used to retrieve any kinetic information on the enzyme, such as Vmax or Km. You need to set up isothermal experiments with varying substrate concentrations to determine those.
Guest1, 16.10.2007 16:41
(Yuri K @ 16.10.2007 17:34)
Ссылка на исходное сообщение  Щхат тхе Хелл аре ёу талкинг абоут?!

Бефоре ёу цопы-пастед халф оф фуцкинг ПубМед, плеасе стоп фор а сецонд анд усе ёур блооды браин. Кинетицс оф ПЦР АРЕ НОТ ензыме кинетицс ас десцрибед бы Мичаелис-Ментен еяуатион, бецаусе ПЦР ис ан артифициал цыцлинг процесс, нот ан ензыме-цаталызед реацтион ин исолатион.  Тхерефоре, кинетицс оф ПЦР, бе ит реал-тиме ор енд-поинт меасурементс, ЦАН НОТ бе усед то ретриеве аны кинетиц информатион он тхе ензыме, суч ас Вмах ор Км. Ёу неед то сет уп исотхермал ехпериментс щитх варыинг субстрате цонцентратионс то детермине тхосе.

smile.gif Юр - у тебя с юмором к старости проблемы smile.gif а математические модели ПЦР однакож публикуют lol.gif
Yuri K, 16.10.2007 16:46
(Guest1 @ 16.10.2007 16:41)
Ссылка на исходное сообщение  smile.gif Юр - у тебя с юмором к старости проблемы  smile.gif
а математические модели ПЦР однакож публикуют  lol.gif

Yeah, I can be grouchy in the mornings, before my 3d or 4th cup of coffee ;-)

I am not saying that PCR has no math in it. But math of PCR is a totally different kind of math.
vrida, 17.05.2020 08:07
сайтсайтсайтсайтсайт
сайтсайтсайтсайтсайт
сайтсайтсайтсайтсайт
сайтсайтсайтсайтсайт
сайтсайтсайтсайтсайт
сайтсайтсайтсайтсайт
сайтсайтсайтсайтсайт
сайтсайтсайтсайтсайт
сайтсайтсайтсайтсайт
сайтсайтсайтсайтсайт
сайтсайтсайтсайтсайт
сайтсайтсайтсайтсайт
сайтсайтсайтсайтсайт
сайтсайтсайтсайтсайт
сайтсайтсайтсайтсайт
сайтсайтсайтсайтсайт
сайтсайтсайтсайтсайт
сайтсайтсайтсайтсайт
сайтсайтсайтсайтсайт
сайтсайтсайтсайтсайт
сайтсайтсайтсайтсайт
сайтсайтсайтсайтсайт
сайтсайтсайтсайтсайт
сайтсайтсайтсайтсайт
сайтсайтсайтсайтсайт
сайтсайтсайтсайтсайт
сайтсайтсайтсайтсайт
сайтсайтсайтсайтсайт
сайтсайтсайтсайтсайт
сайтсайтсайтсайтсайт
сайтсайтсайтсайтсайт
сайтсайтсайтсайтсайт
сайтсайтсайтсайтсайт
сайтсайтсайтсайтсайт
сайтсайтсайтсайтсайт
сайтсайтсайтсайтсайт
сайтсайтсайтсайтсайт
сайтсайтсайтсайтсайт
сайтсайтсайтсайтсайт
сайтсайтсайтсайтсайт
сайтсайтсайтсайтсайт
сайтсайтсайтсайтсайт
сайтсайтсайтсайтсайт
сайтсайтсайтсайтсайт
сайтсайт
kubeo88, 02.11.2020 09:36
You’ve written nice post, I am gonna bookmark this page, thanks for info. I actually appreciate your own position and I will be sure to come back here. Thanks. paper io 2
guest: 123 , 31.05.2022 09:08
SINCE LAUNCHING AMB CASINO HIS INVASION OF UKRAINE, RUSSIA'S FC SLOT PRESIDENT VLADIMIR PUTIN 88KTC HAS FACED AN UNPRECEDENTED 11HILO GLOBAL RESPONSE, FROM CULTURAL BOYCOTTS TO 123GOAL COUNTRIES RADICALLY 123VEGA TRANSFORMING THEIR ALLBET FOREIGN POLICIES. BUT THE สูตรสล็อต LONGER THE CONFLICT CANDY BURST GOES ON, THE MORE SIGNS THERE ปั่นสล็อต ARE OF DIVISIONS.
vrida2, 05.06.2022 14:00
сайтсайтсайтсайтсайт
сайтсайтсайтсайтсайт
сайтсайтсайтсайтсайт
сайтсайтсайтсайтсайт
сайтсайтсайтсайтсайт
сайтсайтсайтсайтсайт
сайтсайтсайтсайтсайт
сайтсайтсайтсайтсайт
сайтсайтсайтсайтсайт
сайтсайтсайтсайтсайт
сайтсайтсайтсайтсайт
сайтсайтсайтсайтсайт
сайтсайтсайтсайтсайт
сайтсайтсайтсайтсайт
сайтсайтсайтсайтсайт
сайтсайтсайтсайтсайт
сайтсайтсайтсайтсайт
сайтсайтсайтсайтсайт
сайтсайтсайтсайтсайт
сайтсайтсайтсайтсайт
сайтсайтсайтсайтсайт
сайтсайтсайтсайтсайт
сайтсайтинфосайтсайт
сайтсайтсайтсайтсайт
сайтсайтсайтсайтсайт
сайтсайтсайтсайтсайт
сайтсайтсайтсайтсайт
сайтсайтсайтсайтсайт
сайтсайтсайтсайтсайт
сайтсайтсайтсайтсайт
сайтсайтсайтсайтсайт
сайтсайтсайтсайтсайт
сайтсайтсайтсайтсайт
сайтсайтсайтсайтсайт
сайтсайтсайтсайтсайт
сайтсайтсайтсайтсайт
сайтсайтсайтсайтсайт
сайтсайтсайтсайтсайт
сайтсайтсайтсайтсайт
сайтсайтсайтсайтсайт
сайтсайтсайтсайтсайт
сайтсайтсайтсайтсайт
сайтсайтсайтсайтсайт
сайтсайтсайтсайтсайт
tuchkasсайтсайт
asda, 06.06.2022 09:58
South Korea 123VEGA and the US launched WAZDAN eight missiles WM CASINO on Monday, in AFFILIATE response to a ลิงค์รับทรัพย์ volley of ballistic missiles fired by North Korea the 123GOAL previous day. It comes 88KTC as Pyongyang continues FC SLOT to escalate its AMB CASINO missile tests. South 11HILO Korea's president Yoon Suk-yeol.
guest: 123 , 11.06.2022 11:11
Saxon Mullins 123VEGA says she once had PRAGMATIC PLAY romantic dreams of what her 'first time' would ICONIC GAMING be like. In none was หวยปิงปอง she paralysed by fear in a Sydney ปั่นสล็อต alleyway, aged 18, with a 123GOAL man she had met only minutes earlier. Ms 88KTC Mullins has always maintained FC SLOT this incident - in 2013 - was rape. It spurred AMB CASINO her to push for legal 11HILO reform in Australia, after a long court battle ended with a judge finding the man involved did not realise she hadn't consented to sex.
tulieng, 23.09.2022 09:23
Agen judi online IDN Slot saat ini sudah banyak tersebar di internet dan tentunya anda bingung untuk memilih yang mana yang terbaik, jangan khawatir kini hadir situs situs IDN Slot terhoki dan terpercaya dapat membawa anda kepada hoki yang besar.Jangan ragu untuk mengajak teman anda bermain karena anda akan mendapatkan bonus ketika mengajak teman anda bermain di situs IDN Slot Paling Gacor , langsung saja hubungi cs yang online untuk melayani anda. wow
Yukk.. Buruan Mainkan gamenya, Jadilah Pemenang dalam situs Favorite Anda
✅Minimal Deposit Rp 10.000
✅Bonus New Member 100%
✅Bonus Cashback 100%
✅Proses Deposit & Withdraw Hanya 3 Menit (Tidak Pakai Lama)

rekomendasi situs main terpercaya dan pastinya sangatlah aman!!
http://165.22.107.220
http://68.183.230.133
http://206.189.83.86
https://194.233.91.180
https://betslot88.blog.fc2.com
https://kingbet.web.fc2.com
https://kdslot.org
https://hokislot.fun
https://tebakskor.net
https://pialadunia2022.pro
https://worldcup2022.pro
https://sedanghoki.info
https://supercuan.live
https://kdslots.blog.fc2.com
https://asiabet88.org
https://139.59.97.91
https://68.183.238.49
https://bet88slot.org
https://indoslots.blog.fc2.com
https://shienslot.blog.fc2.com
https://kdslots.blog.fc2.com
https://slotgglogin.blog.fc2.com
https://niagabet.blog.fc2.com
https://asiabet.blog.fc2.com
https://indogame.blog.fc2.com
https://slotasiabet88.blog.fc2.com
vrida2, 10.11.2022 23:37
http://audiobookkeeper.ruhttp://cottagenet.ruhttp://eyesvision.ruhttp://eyesvisions.comhttp://factoringfee.ru
http://filmzones.ruhttp://gadwall.ruhttp://gaffertape.ruhttp://gageboard.ruhttp://gagrule.ru
http://gallduct.ruhttp://galvanometric.ruhttp://gangforeman.ruhttp://gangwayplatform.ruhttp://garbagechute.ru
http://gardeningleave.ruhttp://gascautery.ruhttp://gashbucket.ruhttp://gasreturn.ruhttp://gatedsweep.ru
http://gaugemodel.ruhttp://gaussianfilter.ruhttp://gearpitchdiameter.ruhttp://geartreating.ruhttp://generalizedanalysis.ru
http://generalprovisions.ruhttp://geophysicalprobe.ruhttp://geriatricnurse.ruhttp://getintoaflap.ruhttp://getthebounce.ru
http://habeascorpus.ruhttp://habituate.ruhttp://hackedbolt.ruhttp://hackworker.ruhttp://hadronicannihilation.ru
http://haemagglutinin.ruhttp://hailsquall.ruhttp://hairysphere.ruhttp://halforderfringe.ruhttp://halfsiblings.ru
http://hallofresidence.ruhttp://haltstate.ruhttp://handcoding.ruhttp://handportedhead.ruhttp://handradar.ru
http://handsfreetelephone.ruhttp://hangonpart.ruhttp://haphazardwinding.ruhttp://hardalloyteeth.ruhttp://hardasiron.ru
http://hardenedconcrete.ruhttp://harmonicinteraction.ruhttp://hartlaubgoose.ruhttp://hatchholddown.ruhttp://haveafinetime.ru
http://hazardousatmosphere.ruhttp://headregulator.ruhttp://heartofgold.ruhttp://heatageingresistance.ruhttp://heatinggas.ru
http://heavydutymetalcutting.ruhttp://jacketedwall.ruhttp://japanesecedar.ruhttp://jibtypecrane.ruhttp://jobabandonment.ru
http://jobstress.ruhttp://jogformation.ruhttp://jointcapsule.ruhttp://jointsealingmaterial.ruhttp://journallubricator.ru
http://juicecatcher.ruhttp://junctionofchannels.ruhttp://justiciablehomicide.ruhttp://juxtapositiontwin.ruhttp://kaposidisease.ru
http://keepagoodoffing.ruhttp://keepsmthinhand.ruhttp://kentishglory.ruhttp://kerbweight.ruhttp://kerrrotation.ru
http://keymanassurance.ruhttp://keyserum.ruhttp://kickplate.ruhttp://killthefattedcalf.ruhttp://kilowattsecond.ru
http://kingweakfish.ruhttp://kinozones.ruhttp://kleinbottle.ruhttp://kneejoint.ruhttp://knifesethouse.ru
http://knockonatom.ruhttp://knowledgestate.ruhttp://kondoferromagnet.ruhttp://labeledgraph.ruhttp://laborracket.ru
http://labourearnings.ruhttp://labourleasing.ruhttp://laburnumtree.ruhttp://lacingcourse.ruhttp://lacrimalpoint.ru
http://lactogenicfactor.ruhttp://lacunarycoefficient.ruhttp://ladletreatediron.ruhttp://laggingload.ruhttp://laissezaller.ru
http://lambdatransition.ruhttp://laminatedmaterial.ruhttp://lammasshoot.ruhttp://lamphouse.ruhttp://lancecorporal.ru
http://lancingdie.ruhttp://landingdoor.ruhttp://landmarksensor.ruhttp://landreform.ruhttp://landuseratio.ru
http://languagelaboratory.ruhttp://largeheart.ruhttp://lasercalibration.ruhttp://laserlens.ruhttp://laserpulse.ru
http://laterevent.ruhttp://latrinesergeant.ruhttp://layabout.ruhttp://leadcoating.ruhttp://leadingfirm.ru
http://learningcurve.ruhttp://leaveword.ruhttp://machinesensible.ruhttp://magneticequator.ruhttp://magnetotelluricfield.ru
http://mailinghouse.ruhttp://majorconcern.ruhttp://mammasdarling.ruhttp://managerialstaff.ruhttp://manipulatinghand.ru
http://manualchoke.ruhttp://medinfobooks.ruhttp://mp3lists.ruhttp://nameresolution.ruhttp://naphtheneseries.ru
http://narrowmouthed.ruhttp://nationalcensus.ruhttp://naturalfunctor.ruhttp://navelseed.ruhttp://neatplaster.ru
http://necroticcaries.ruhttp://negativefibration.ruhttp://neighbouringrights.ruhttp://objectmodule.ruhttp://observationballoon.ru
http://obstructivepatent.ruhttp://oceanmining.ruhttp://octupolephonon.ruhttp://offlinesystem.ruhttp://offsetholder.ru
http://olibanumresinoid.ruhttp://onesticket.ruhttp://packedspheres.ruhttp://pagingterminal.ruhttp://palatinebones.ru
http://palmberry.ruhttp://papercoating.ruhttp://paraconvexgroup.ruhttp://parasolmonoplane.ruhttp://parkingbrake.ru
http://partfamily.ruhttp://partialmajorant.ruhttp://quadrupleworm.ruhttp://qualitybooster.ruhttp://quasimoney.ru
http://quenchedspark.ruhttp://quodrecuperet.ruhttp://rabbetledge.ruhttp://radialchaser.ruhttp://radiationestimator.ru
http://railwaybridge.ruhttp://randomcoloration.ruhttp://rapidgrowth.ruhttp://rattlesnakemaster.ruhttp://reachthroughregion.ru
http://readingmagnifier.ruhttp://rearchain.ruhttp://recessioncone.ruhttp://recordedassignment.ruhttp://rectifiersubstation.ru
http://redemptionvalue.ruhttp://reducingflange.ruhttp://referenceantigen.ruhttp://regeneratedprotein.ruhttp://reinvestmentplan.ru
http://safedrilling.ruhttp://sagprofile.ruhttp://salestypelease.ruhttp://samplinginterval.ruhttp://satellitehydrology.ru
http://scarcecommodity.ruhttp://scrapermat.ruhttp://screwingunit.ruhttp://seawaterpump.ruhttp://secondaryblock.ru
http://secularclergy.ruhttp://seismicefficiency.ruhttp://selectivediffuser.ruhttp://semiasphalticflux.ruhttp://semifinishmachining.ru
http://spicetrade.ruhttp://spysale.ruhttp://stungun.ruhttp://tacticaldiameter.ruhttp://tailstockcenter.ru
http://tamecurve.ruhttp://tapecorrection.ruhttp://tappingchuck.ruhttp://taskreasoning.ruhttp://technicalgrade.ru
http://telangiectaticlipoma.ruhttp://telescopicdamper.ruhttp://temperateclimate.ruhttp://temperedmeasure.ruhttp://tenementbuilding.ru
tuchkashttp://ultramaficrock.ruhttp://ultraviolettesting.ru
Jaipurescort9, 11.11.2022 15:03
Jaipur Escorts
Agra Escorts
Ahmedabad Escorts
Aizwal Escorts
Ajmer Escorts
Aligarh Escorts
Allahabad Escorts
Alwar Escorts
Amethi Escorts
Amreli Escorts
Amritsar Escorts
Anand Escorts
Anantnag Escorts
Anjaw Escorts
Araria Escorts
Aurangabad Escorts
Azamgarh Escorts
Bageshwar Escorts
Balaghat Escorts
Balasore Escorts
Balod Escorts
Bandipora Escorts
Bareilly Escorts
Barmer Escorts
Bastar Escorts
Bathinda Escorts
Begusarai Escorts
Bengaluru Escorts
Bhagalpur Escorts
Bharatpur Escorts
Bhavnagar Escorts
Bhind Escorts
Bhiwani Escorts
Bhopal Escorts
Bijnor Escorts
Bikaner Escorts
Bilaspur Escorts
Bokaro Escorts
Burhanpur Escorts
Buxar Escorts
Chandigarh Escorts
Chennai Escorts
Chittorgarh Escorts
Coimbatore Escorts
Cuttack Escorts
Daman Escorts
Dantewada Escorts
Darbhanga Escorts
Darjeeling Escorts
Daryaganj Escorts
Defence Escorts
Dehradun Escorts
Delhi Escorts
Dhanbad Escorts
Dhule Escorts
Diu Escorts
Ernakulam Escorts
Etah Escorts
Faizabad Escorts
Faridabad Escorts
Faridkot Escorts
Farrukhabad Escorts
Fatehabad Escorts
Firozabad Escorts
Firozpur Escorts
Ganderbal Escorts
Gandhi Nagar Escorts
Ganganagar Escorts
Gangtok Escorts
Gariaband Escorts
Gaya Escorts
Ghaziabad Escorts
Ghazipur Escorts
Girsomnath Escorts
Goa Escorts
Golaghat Escorts
Gonda Escorts
Gorakhpur Escorts
Guna Escorts
Guntur Escorts
Gurdaspur Escorts
Gurugram Escorts
Gwalior Escorts
Hamirpur Escorts
Hanumangarh Escorts
Haridwar Escorts
Hathras Escorts
Hazaribagh Escorts
Hisar Escorts
Hoshangabad Escorts
Hoshiarpur Escorts
Idukki Escorts
Indore Escorts
Jabalpur Escorts
Jaisalmer Escorts
Jalandhar Escorts
Jalgaon Escorts
Jammu And Kashmir Escorts
Jammu Escorts
Jamnagar Escorts
Jaunpur Escorts
Jehanabad Escorts
Jhalawar Escorts
Jhansi Escorts
Jind Escorts
Jodhpur Escorts
Junagarh Escorts
Kalahandi Escorts
Kalpeni Escorts
Kanchipuram Escorts
Kangra Escorts
Kannauj Escorts
Kanniyakumari Escorts
Kannur Escorts
Kanpur Escorts
Kapurthala Escorts
Kargil Escorts
Karnal Escorts
Katni Escorts
Kheda Escorts
Kinnaur Escorts
Kishanganj Escorts
Kishangarh Escorts
Kohima Escorts
Kolar Escorts
Kolhapur Escorts
Kolkata Escorts
Koppal Escorts
Kota Escorts
Kottayam Escorts
Krishna Escorts
Kulgam Escorts
Kullu Escorts
Kutch Escorts
Lahaul Escorts
Lakhimpur Escorts
guest: 123vega , 10.01.2023 07:12
Brazil's President Luiz PG SLOT ทางเข้า Inácio Lula da Silva has JOKER ROMA เว็บตรง vowed to punish supporters of the PG SLOT ซื้อฟรีสปิน country's ex-leader, Jair Bolsonaro, after they stormed Congress. Supporters of the เครดิต ฟรี กด รับ เอง 50 บาท ousted far-right leader also stormed the SLOTXO Supreme Court and surrounded SLOT JOKER the presidential palace. But police regained control ROMA SLOT of the buildings in the capital ทดลองเล่นสล็อตโรม่า Brasilia on Sunday evening after hours สล็อต โร มา เว็บตรง of clashes. Arriving in the city, Lula toured the Supreme Court building to SUPERSLOT เครดิตฟรี see the damage for himself. Brasilia's Civil Police said that 300 people have been arrested.
watches89, 27.11.2023 03:30
The Denise Arctic Sport is ideal for exploration Swiss Replica Watches thanks to its crisp white dial and matte ceramic bezel that are Omega Replica designed to counteract reflections from bright snow during daytime, while the Breitling Replica large illuminated markers are suited for long winter nights. Replica Watches A subtle power reserve indicator displays how much power is stored within the in-house regulated movement, which is precision certified to an impressive -1+4 seconds per 24 hours running time.
Это — лёгкая версия форума. Чтобы попасть на полную, щелкните здесь.
Invision Power Board © 2001-2024 Invision Power Services, Inc.