Коллеги, занимаюсь культурой эндотелиальных клеток. По каким-то причинам клетки при выделении отказываются сползать на коллаген. Подскажите с чем это может быть связано.

всем привет!кто нибудь знает методы Бредфорда,Сушки и ультрафильтрации хромотографии че-то я тут не нашла

Уважаемый гость, который че-то здесь не нашел. Что именно вы хотите узнать? Как высушить и проультрафильтровать хроматографию, что ли? Измерение концентрации белка по Брэдфорду - здесь: http://www.molbiol.ru/protocol/17_18.html

PS: В правильно сформулированном вопросе - половина ответа.

PPS: Поиск рулит.

Уважаемые коллеги,
подскажите, пожалуйста, где можно
купить РНК для проточника
RNase A
Type I-AS
кат номер R 5503

Спасибо!

Уважаемые коллеги,
подскажите, пожалуйста где достать методику определение константу седиментации вируса

Дайте, пожалуйста, информацию о храниении и использовании реактивов для ПЦР: что, как и сколько можно размораживать/замораживать и как долго держать в тепле: полимеразу (знаю, что нельзя доставать из морозильника, но если все же приходтся), dNTP, магний, буфер...
Спасибо.

Все зависит от качества исходных компонентов. Чем меньше замор-размор., тем лучше и поэтому нужно максимально АЛИКВОТИРОВАТЬ растворы. А еще лучше вообще не замораживать и держать при 4 град. Я сам обхожусь и без холодильника ...

Checking DNA labeling (dot blots), digoxigenin & biotin

1. Dilute the labeling DNA as follow:
a. 1µl DNA + 19 µk MQ
b. 1µl DNA + 9µl MQ
2. Mark the Hybond N+ membrane with pencil to indicate the position of the DNA probes to be tested. Leave about 1cm between each position. Include a place for 1 X TE as a control
3. Load 1µl of each DNA probe (and 1X TE control) onto membrane
4. Leave to dry for 1h at 80C
5. Place membrane in buffer 1 (0.1 Tris-HCl, 0.15 M NaCl, ph 7.5)
6. Incubate 30 min in buffer 2 (0.5 % blocking reagent in buffer 1), shake gently
7. Drain membrane slightly and distribute 5 ml of the anti-DIG – AP, streptavidin-AP solution over the membrane (1:5000 = 150 mU/ml. 1µl in 5 ml buffer 2)
8. Incubate the membrane at 37C for 30 min
9. Wash the membrane in buffer 1 for 3x5 min
10. Transfer membrane to buffer 3 (0.1 M Tris ph 7.5, 0.1 M NaCl, 0.1 M Mg Cl2) for 2 min
11. Add 22 µl NBT to 5 ml buffer 3 and mix gently
12. Add 16.5 l BCIP to the NBT solution and mix gently
13. Add 5 ml NBT/BCIP detection reagents and leave for 5-10 min. in the dark to fully develop the color
14. Wash the membrane in water and air dry

как можно самим приготовить формальдегид?

Теоретически можно окислить метанол чем-нить типа оксида железа...
Но не проще ли просто купить

Люди!!!кто-нибудь выделял липопротеины низкой плотности,дайте намек али ссылку на методику!!пжааааалста!

{{Elena_ /18.03.2007 20:06/
(lkorochkin @ 06.09.2006 01:42)
У меня есть методика получения культур клеток фибробластов зародыша ципленка.}}}}


Еlena, ты не могла бы прислать эту методику на мой мэйл, пожалуйста, grif-rent@rambler.ru
заранее спасибо.

подскажите, пожайлуста,состав буфера для проточной цитометрии растительных тканей

Скажите, пожалуйста, где достать методику по определению содержания диаминопимелиновой кислоты у актиномицетов. очень надо!

Glupiy vopros - kolonka 10/30 chto znachit? Spasibo.

Подскажите, пожалуйста, как собирать и хранить кровь в полевых условиях (в теч. 1-4 недель, заморозка невозможна), для дальнейшего выделения ДНК. Никак не могу найти конкретных методов!

Выбор способа хранения крови в полевых условиях, как ни странно, зависит от предстоящего метода выделения ДНК да и от решаемых задач... Мне понравилось сушить образцы крови на фильтровальной бумаге (пару часов на воздухе, но не на солцепеке , и в Зиплок-пакет) и выделять ДНК спокойно в лабе стандартным китом. Бумагу рекомендую предварительно пропитать ЭДТА.

Доброго времени суток!!
Подскажите, пожалуйста, методу выделения головного нервного ганглия Drosophila melanogaster из куколки (для приготовления препаратов), либо методу приготовления гистологических срезов - если это вообще делают с куколками...
По-идее, нервная система гистолизу не подвергается...

Здравствуйте! Подскажите пожалуйста методику приготовления компетентных клеток дрожжей K.lactis для электропорации. Спасибо.

Коллеги, подскажите, пожалуйста, методику получения экстрактов РАСТЕНИЙ для опреедления содержания нитритов реактивом Грисса (Sigma). Кто знает, ответьте, будте добры, на alelle@online.ua

Кто-нибудь определял резус фактор ПЦР-ом, ДНК из хориона?

Люди помогите с электрофорезо мочи, он у нас не проходит!!!!У нас вет врачей!! Если у кого-нибудь есть данные по этому или книги подскажите где это можно найти!!!! Заренее очень благодарна

Сробно отрубайте электричество!

подскажите пожалуйста точную методику очистки асцитной жидкости (или сыворотки)с помощью афинной хроматографии. В наличии есть бром-циан сефароза. Буду благодарен!

--подскажите пожалуйста точную методику очистки асцитной жидкости (или сыворотки)с помощью афинной хроматографии. В наличии есть бром-циан сефароза. Буду благодарен!

Идите на сайт амершам GE. И скачайте мануалсы на бром-циан сефарозу, и на Hi-Trap белок G. Затем купите этот самый белок G, пришейте его на бром-циан сефарозу(согласно протоколу) и далее используйте протокол для Hi-Trap, но не надо продавливать шприцами, а просто сделать бэч или колонку и промывать(прокапывать). Так вы и получите чистые антитела из асцита, если конечно они того типа, что связываются с белком G. Вместо белка G можно использовать антиген, или антитела против выших моноклонов.

ГАГ (гликозаминогликаны) снимаются с белка кора в ПГ (протеогликанах) с помощью бор гидрида.
Если надо могу посмотреть методику.

Большая просьба подсказать метод определения общего метилирования ДНК!!!

Здравствуйте! Подскажите, пожалуйста, где в интернете можно найти литературу (книги, статьи на русском или английском) по методам изучения клеток. Интересуют общие описания методов. Спасибо.

здравствуйте! может кто-нибудь поделиться новой методикой определения ингибитора трипсина? Заранее спасибо!

А есть где тема про трансфекцию? Протоколы с трансфекциями простые и изестны, но есть много мелких нюансов, которые хотелось бы обсудить.

Paraformaldehyde can be depolymerized to formaldehyde gas by dry heating and to formaldehyde solution by water in the presence of alkali or heat. The very pure formaldehyde solutions obtained in this way are used as a fixative for microscopy and histology.

http://en.wikipedia.org/wiki/Paraformaldehyde

LOL

Уважаемые коллеги!Может кто-нибудь подскажет,в чем может быть причина того, что при высеве на среду с X-gal и IPTG все штаммы получаются бледно-голубыми и отобрать тот, который может нести вставку практически невозможно. Клонирование проводилось в pUC18.Заранее благодарю!

Здравствуйте!Не подскажет мне кто-нибудь как определяют длительность стадий клеточного цикла?И вообще может ли это время быть абсолютным(не зависеть от параметров эксперимента)?

кто нибудь ставил гибридизацию с теломерной ДНК? раскажите условия (Саузерн)

--кто нибудь ставил гибридизацию с теломерной ДНК? раскажите условия (Саузерн)

Условия стандартные по Маниатису, ничего специального не надо. Если конечно теломер не очень длинный(тогда пульс форез). Ну TRF надо получить( лучше парочкой мелкощепящиих рестриктаз)

Влияет ли конденсат на молярность ?

И стоит ли его "принудительно" стряхивать...
Что-то сомнения замучили..

у кого-нибудь есть методика полярографии для бактерии?

>Влияет ли конденсат на молярность ?

Однозначно. Если есть конденсат всегда сначала чуток крутануть надо.

Добрый день!

Прошу подсказать где можно найти информацию о методике получения полностью человеческих моноклональных антител на бактериях/лаб.животных.

Спасибо!

Илья
pirogovkatim@mail.ru

как определить раствор гликопротеина

Здравствуйте!
Буду бесконечно рада любой информации, касающейся определения активности NK клеток и определения содержания внутриклеточных цитокинов методом проточной цитофлуорометрии.
Спасибо!

Здравствуйте.
Помогите, пожалуйста, найти какую-либо информацию на тему "Выделение генов: синтез комплиментарной ДНК, блот-гибридизация".
Заранее очень благодарна:))

Хотела бы спросить тех кто работал с 3 нитропропионовой кислотой (3NP).
Мне нужно сделать transtympanic injection во внутрь уха мышам, но я не знаю какую концентрацию нужно исползовать, посколько в больших дозах и концентрации 3NP токсичен?

Заранее спасибо

прикольно тутаааа)))))))))0

а кто-нибудь знает про вирус герпеса человека 6-го типа?если у кого че завалялось,то ПОЖАЛУЙСТА,пришлите это сюда-korolevka-mur@mail.ru/vyt bynthtcyf?d xfcnyjcnb lbfuyjcnbrf///

этот герпес просто шестерка

так не бывает, у Вас что-то с реактивами. Все стандартные штаммы типа XL1, DH5 alpha, HB, Sure, JM и прочее вполне годны для бело-голубой селекции. Надо по очереди сменить все реактивы. А может, вы сильно в горячий агар льете X-gal, он у Вас валится? Или исходно того-с? Смените прежде всего его, родимого

Привет всем!
Огромная просьба: подскажите пожалуйста метод оценки пролиферационной активности пула клеток семенников (для ленейных мышей). Заранее спасибо.

Коллеги здравствуйте! Не подскажете методики синтеза коньюгатов антибиотиков (для иммунизации)