--Да, присутствуют: использую апротинин, леупептин, ортованадат и PMSF. Несколько лет назад эта методика работала в этой же научной группе, а теперь в моих руках - не получается
Гуга! Здесь ингибитор фосфатаз ванадат, разве что.
Мой вам совет добавить в форез и во все буфера: сэмпл, для переноса, инкубации и тд. ЭДТА до 1мМ. Очень помогает от фосфатаз дешево и сердито.
-а я использовала молоко в случае вторичного антитела. Неужели это имеет значение?!
А вы сами то подумайте основной белок молока это что? - КАЗЕИН. А казеин один из самых фосфорилированных белков. Желатин еще можно вместо BSA.