Протоколы экспериментов на сайте molbiol.ru. Работа с бактериями. Выделение pDNA. Получение одноцепочечной DNA. Работа с фагом лямбда. Электрофорез. Выделение ДНК из агарозного геля. Клонирование. Олигонуклеотиды. PCR. Cиквенс. Выделение DNA из эукариот. Работа с RNA. Библиотеки. Работа с белками. Экспрессия белков. Работа с культурами эукариотических клеток. Иммуногистохимия и in situ гибридизация. Макро-методы. Получение серийных делеций. Анализ профилей экспрессии. Работа с Drosophila melanogaster.

Окраска гликопротеинов по Шиффу с помощью алцианового синего.

Гели фиксируют 30 мин в 12.5%-ной ТХУ, ополаскивают дистиллированной водой и помещают на 50 мин в 1%-ный раствор иодной кислоты (HIO3) в 5%-ной уксусной кислоте. Избыток периодата удаляют, промывая гели несколько раз дистиллированной водой. Затем их погружают на 30 мин в 0,5%-ный раствор метабисульфита натрия, опять промывают дистиллированной водой и помещают в водный раствор, содержащий 0,5% алцианового синего и 3% уксусной кислоты. Через 4 ч фон обесцвечивают 7%-ной уксусной кислотой.

есть вопросик, народ кто имел счастье работать с красителем Хехста (bis-benzimide)? поделитесь опытом, пожалуйста!

Мне приходилось работать. А что Вас конкретно интересует?

Кто лигирует по тупым концам? Как влияет ПЭГ?

Если фрагменты - то очень хорошо; а если надо прицепить адапторы, то адапторов как не было -- только что обожглись.

Граждане,
Кто-нибудь работает с DNA methylation? Есть задача посмотреть метилирование промоторов нескольких генов. Кто-нибудь может помочь советом, а лучше протоколом :)))? Предполагается использовать бисульфидный метод.
Заранее благодарю за отзывчивость!
В свою очеледь могу поделиться опытом по методу задержки в геле (ретардация).
pivelena

Коллеги! поделитесь методикой проверки специфичности фосфотирозиновых антител

Уважаемый редактор,
хотел бы выложить в раздел методику по иммунопреципитации хроматина. Как это можно сделать?
Спасибо.

Можно прислать методику на redactor@molbiol.ru
Вам спасибо!

Французский сайт форезных причиндалов. Содержит этакий учебник по всяким видам форезов (на аглицком), может быть вполне полезен начинающим, а может и не только. К сожалению, весь текст в виде графики выложен. В какой раздел складывать я не знаю.

http://www.apelex.fr/anglais/applications/cadre.htm

На этом сайте довольно много полезной индормации по разнообразным коммерческим ферментам, как то мол.веса, коеффициенты екстинции, оптимумы активности, условия определения активности и прочая фигня.

http://www.worthington-biochem.com/index/manual.html

Уважаемые коллеги!Поделитесь, пожалуйста, методами определения активности фосфолипазы С в нервной ткани. Заранее благодарна Вам.

это есть в нормальном (текстовом) виде на http://nationaldiagnostics.com/articles.php/tPath/1.

коллеги!У кого хорошо получаются пероксидазные конъюгаты? Поделетесь опытом

Уважаемые коллеги!
Посоветуйте, пожалуйста, что делать, если не получается нормальный сиквенс ПЦР-продукта с автоматического сиквенатора? С самим ПЦР-продуктом всё в порядке (контроль чистый, после очистки на колонках Wizard на форезе видна 1 чёткая полоса соответствующей длины, то, что удаётся прочесть(200-300 нт максимум) соответствует предполагаемой последовательности). С праймерами тоже всё должно быть в порядке, т.к. не так давно с них был отсеквенирован другой продукт и всё было в порядке, читалось по 500-700 нт. Я уже переделывала пару раз продукт - но безрезультатно. Единственное, что могу предположить - может быть при очистке не полностью уходит ЭДТА из ТАЕ буфера и полимераза плохо работает. Может ли влиять на сиквенс, скажем, длина продукта? (Почему-то пока я сиквенировала продукты до 1000нт всё было нормально). Если кто-нибудь даст дельный совет, буду очень благодарна!

подскажите методику определения Тх1 и Тх2 :цонфусед:

Вообще-то такие вопросы, как выше лучше задавать на форуме в отдельных темах .

Могу поделиться опытом по иммуногистохимии. Кто желает пишите
Лена

Парочка вопросов по белковой химии, имеющих, можно сказать, "жизненно важное" для "дисера" значение:
Люди! Встречал ли кто-нибудь методику экстракции белков бактериального s-слоя, не разрушающую саму клетку (клеточную стенку, внешнюю мембрану и т.д.)?
А также методику отделения полисахаридной части гликопротеина от непосредственно белковой?

Всем, кто поможет - заранее большущее спасибо!

Коллеги, кто нибудь знает методику приготовления из полиакриламида линейного полиакриламда?

Коллеги! У меня есть одни вопрос. Есть ли у кого-нибудь протокол хромотографии на протеин G сефароза? Очень нужно.

Я больше химик, чем биолог, но так получилось, что работаю теперь с физической биохимией, а методы молекулярной биологии применять нельзя - "чужая" работа и "кормит" других :).
Тематика:полипептиды, полисахариды, вещества средней молекулярной массы, токсины.Обращайтесь vesanna@rambler.ru.
Занимаюсь углеродными гемосорбентами, гемосорбцией.
Если что, буду рада информации по работе с крахмалом, желатином (желатинолем).
Имею много лит. сводок по тематикам.
Подскажите какие маркеры с высокой молекулярной массой Вы знаете?

Коллеги! Занимался ли кто нибудь конъюгацией пероксидазы хрена с моноклональными антителами человека для твердофазного ИФА. Поделитесь опытом!

Скажите пожалуйста, какие скорости при упаковке Bio-Rex 70, нанесении и элюции?

Люди! Кто гонял пааг рнковые гели, подскажите, почему образцы не входят в гель, а остаются полосочкой в самом начале дорожки? гель 5%, время 1-2 часа, образцы-клеточная РНК из E.coli различной концентрации

Коллеги! Кто знает что нибудь о камерах для электрослияния при получении гибридом. С ПЭГом че то не прет. Помогите!

Народ, срочно нужна методический протокол твердофазного иммуноферментного анализа фитогормонов растений.

Не хочу Вас огорчать в День Победы, но, боюсь, тако(й)го нет в природе.
Твердофазный ИФА, как правило, это высокоспецифичный метод анализа, потому для каждого конкретного вещества (например, фитогормона) придется разрабатывать индивидуальный набор: получать антитела, иммунный (аффинный) сорбент, конъюгат фермента с Аг или Ат, а потом оптимизировать протокол.
А если купите набор(ы), то протокол приложат бесплатно.

В общем-то, вопрос Вы задали некорректно. Словосочетание "протокол ИФА" звучит как-то несуразно. Бывает протокол кислотно-основного титрования, определния глюкозы в сыворотке крови, есть даже протокол силанизации стекла, а вот то, что Вы просите... Протокол ИФА - это ведь всегда протокол для конкретного набора реагентов. А в общем виде "где возьмешь?", как говорил сами знаете кто.

Уважаемые коллеги ! Большая просьба к Вам поделится методическими рекомендациями
по поводу разделения хлорофил-белковых комплексов ФС1 и ФС2 в условиях нативного
электрофореза.

Очень нужна методика по выделению ДНК из фиксированых микропрепаратов

Коллеги! Если кто нибудь знает как очистить ДНК спермы лосося в больших колличествах - поделитесь опытом. Заранее благодарен.

уважаемые коллеги. кто-нибудь занимался иммунизацией крыс? конкретно меня интересуют протоколы получения неспецифического воспаления у крыс, например, подкожно вводят спирт или хлороформ...кто-нибудь владеет знаниями, я только по наслышке. спасибо за внимание:)

Для гостя от 9 мая. Мы занимаемся ИФА ИУК ЦК и АБК. Давайте адрес, вышлю протоколы (я так понимаю Вы имели в виду просто последовательность действий). Здесь писать слишком долго.

pojaluista pomogite
kak ya mogu naiti programmu kolichestvennogo opredeleniya DHA

необходима методика перикисного окисления липидов!!!спасибо.

А какая конкретно методика? Их дохрена сейчас. Что определять надо?

Кто-нибудь проводил микродиализ? Очень нужен метод!!!

Про проточную цитометрию: Срочно надо решить какой цитометр лучше FACSCalibur или EPICS XL. Никто из присустувующих не работал на подобном оборудовании. Знающие люди в отпуске. Help me, pls!!!
Что такое система пробоподготовки и автосемплер?
Можно ли обойтись без них? Насколько это осложнит работу?

Ребята, я работал и с тем- и с тем.
Берите Калибур - ибо у него (несмотря на то, что тоже 4 цвета)- не 1 , а 2 лазера - значит можно шире "играться" с комбинациями флуорохромов.
Сисиема пробоподготовки- то бишь samplre preparation workstation - оддельный дивайс для подготовки семплов. Удобен в клинике при работе со стандартными китами.
Автосемплер- "каруселька"- автоматический загрузчик пробирок ( в XL-MCL например).

P.S. Кстати, на Калибуре и сортить можно (есть там такая опция)- но медленно

P.P.S. А для чего вам цитометр нуже? Под какие задачи? Фундаменталка или клиника?

Спасибо огромное!
Цитометр нужен сейчас для фундаментальных исследований (Клеточный цикл, апоптоз, CD-типирование и др.), в перспективе возможны клинические анализы (только перспектива эта очень далекая... )

Уважаемые коллеги! Будем ОЧЕНЬ признательны, если кто-нибудь подскажет нам, в чем растворить валиномицин так, чтобы соответствующий растворитель не повлиял на функциональное состояние митохондрий.
Заранее благодарим!

Уважаемые коллеги!
Кто-нибудь определял жизнеспособность микроводорослей методом дифференциального окрашивания? Поделитесь опытом!!!

С уважение и надеждой,
Ирина :))

Насчет микродиализа вопрос хороший .Мы тоже хотим попробовать определять нейротрансмитеры в моозгах. Если кто его делал не мог бы в 2 словах описать методику.Заранее спасибо.

Коллеги, занимался ли кто из вас анализом ДНК пчел или хотя бы любых других видов насекомых, очень нужна информация. Ответьте.

У нас в институте имеется прибор для тонкокапилярного электрофореза фирмы Агилент технолоджист (Германия). Если у кого есть методики
для разгона фрагментов ДНК на этом приборе -сообщите пожалуйста.

Добрый день. Подскажите, пожалуйста, кто у нас в стране (какой НИИ) занимается вопросом получения белка (спирта) из нетрадиционного материала (опилки, земля и проч.)

Спасибо,
Илья

Добрый вечер.Кто-нибудь знает что-либо о моделировании повреждения ДНК окислителями?ПОМОГИТЕ!

УВАЖАЕМЫЕ КОЛЛЕГИ!помогите пожалуйста, материал о nick-трансляции.Где можно найти? О факторах, которые влияют, возможных ошибках и т.д.Заранее спасибо.

Народ!! помогите советом!!! а может кто и опытом :-)), пожалуйста!!! как можно определить наличие углевода в комплексе белок-углевод (в данном случае - гиалуроновой кислоты), может есть какая-то специфическая реакция, может окраской ПААГ. буду благодарна за любой совет

Народ, у кого есть методика по получению культур клеток Drosophila melanogaster поделитесь!