Доброго времени суток!
Огромная просьба о помощи! В работе пытаюсь сделать опыты по определению способности тех или иных бактерий к мутагенезу. Результаты сложно интерпритировать.
Может наша методика неидеальна...
Подскажите где взять методики из первоисточников! Может есть какие-то классические методы - золотого стандарта?
Буду рад любым советам!
Заранее спасибо!

методик "общих" нет и не будет, т.к. "на вкус все фломастеры разные".
опишите конкретнее, пожалуйста, что вы хотите смотреть и собираетесь доказывать?

Итак я работаю с разными грамотрицательными бактериями в том числе E.coli. Пытаюсь проанализировать разницу в частотах мутации для штаммов с мутантными 3R генами.
Работаю с фторхинолонами, аминокумаринами и рифампицином. Наша методика проста - суспензию клеток высеваем на чашки с антибиотиком а из разведения смотрим титр.
В итоге получаем какое-то число для каждого штамма.
Вопросы:
1) верна ли методика?
2) как отличить мутантов от "выживших"? только сиквенс?
3) обязателен ли пересев полученных колоний на среду с антибиотиком?
4) какие еще есть методы такого анализа?

"высеваем на чашки с антибиотиком а из разведения смотрим титр" - это больше напоминает жизнеспособность, а не мутагенез.
да, если вы работаете с определением "мутантности", как внесением замен и т.п. в ДНК, то поможет лишь сиквенс. из простого приходит в голову взять плазмиду и клетки Е.коли и каждый раз сиквенировать ее.
что значит обязателен ли пересев на АБ?!! если они у вас приобретают устойчивость, то конечно нужно. если вы физиологию хотите смотреть, то нежелательно, т.к. антибиотики - яды

еще из "тупого" бывает спонтанный мутагенез на, например, спектиномицине: для него известна конкретная замена аминокислотная на рибосоме, обеспечивающая формирование устойчивости к данному антибиотику.

вы понимаете, не поймите меня пожалуйста неправильно, в биологической постановке задачи правильно было бы сформулировать вашу задачу так: насколько меньще колоний у меня вырастит на чашке, если я добавлю к ним, например, азид натрия. вы вашу задачу через задний проход сформулировали: "В работе пытаюсь сделать опыты по определению способности тех или иных бактерий к мутагенезу" у вас вы как вообще? хотите весь мир лучше сделать?!!

Для начала нужно изучить методы определения чувствительности бактерий к антибиотикам. Описаний много. Например:
http://www.antibiotic.ru/rus/all/articles/absens.shtml
Секвенировать для дифференциации мутантов от пророста нет смыла.

Не, ну мало ли они новый АБ тестируют - тогда секвенировать имеет смысл, для расчета его способности мутировать клетки, или если устойчивость к нему может быть обеспечена внесением СНП, тогда вообще можно НГСом "отмазаться))

антибиотики не приводят к новым мутациям.

они обезпечивают отбор в пользу УЖЕ предсуществующих в культуре, которые дают выживающим клеткам резистентность.

методы золотого стандарта - это облучение известной интенсивности и прямая связь частот мутаций в культуре с накопленной экспозиционной дозой. Почитайте опыты Тимофеева-Ресовского и немцев-коллег по определению размера гена (еще до открытия структуры ДНК).

Как нормализуете концентрацию клеток? Нужно параллельно высевать на чашки с антибиотивком и верхние разведения - на чашки без антибиотика. Чем больше высевов - тем точнее ресультат, так как разброс между экспериментами может быть очень большой.

"антибиотики не приводят к новым мутациям." - если увеличение числа хромосом считать мутацией, то приводят все ж.
"они обезпечивают отбор в пользу УЖЕ предсуществующих в культуре, которые дают выживающим клеткам резистентность." - не всегда. иногда использование антибиотиков необходимо для оценки мутагенеза. так, если вас интересует внесение мутации в присутствии антибиотика, то вы можете использовать третье вещество, мутаген, для оценки его мутагенности, когда на выходе будете просто сравнивать контроль и мутаген по количеству проросших колоний. например: сажаем на спектиномицин культуру клеток и одну чашку ставим в темную конмату, другую под УФ-лампу. во втором случае вы получите больше колоний...
в данном случае "вещество", мутаген - УФ-фотоны,
иногда волновые, иногда частичные

золотой стандарт - флуктуационный тест https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pmc/articles/PMC2041832/

https://jumpshare.com/v/QxZ9Rn2mfDCaBq2AdBG1
https://www.edocr.com/v/znnrba3z/watcheshut...lica-Watches-UK
https://www.tuugo.us/Companies/best-replica...s/0310006695505
https://topsitenet.com/article/988178-hints...ca-rolex-watch/
http://simp.ly/p/nxGlWb
https://telegra.ph/Hints-on-Choice-of-a-Hig...lex-Watch-02-22
https://replicarolexwatche2.blog.fc2.com/blog-entry-1.html
https://www.knowpia.com/s/blog_60f7e7c31014a97a
https://zenwriting.net/replicawatches24/hin...ica-rolex-watch
https://globalcatalog.com/replicawatchesuk.us/en
http://www.cplusplus.com/articles/iE1wvCM9/
https://eatsleepride.com/c/346210/hints_on_...ica_rolex_watch
https://www.myminifactory.com/users/watcheshutukcom
https://www.mioola.com/ReplicawatchesUK/post/199764/
https://en.gravatar.com/allreplicawatches24
https://8tracks.com/replicawatchesuk

Anyone can connect บาคาร่าออนไลน์ with their audience slot xo through blogging and enjoy 11hilo you who your readers are. สล็อต the myriad benefits that 123GOAL blogging provides

organic traffic from nigoal from the first sentence.ลิงค์รับทรัพย์ search engines promotional พ ริ ต ตี้ เกม มิ่ง content for social media ราคา บอล and recognition from a new Hotgraph audience you haven’t tapped into yet.