Коллеги! Если кто-нибудь работал с G418. Дрожжи, которые поднимаются у меня на SC чашках с G418 краснеют. И кроме того, ПЦР анализ геномной ДНК не подверждает появление гена устойчивости в нужном месте.
Сталкивался ли кто-нибудь с подобной проблемой?

Дрожжи и G418 довольно странная комбинация. У дрожжей есть очень много других хороших маркеров, например по разным аминокислотным недостаткам. G418 вообще довольно глючная весч. То работает, то не работает. Покраснение может быть связано с особенностями штамма и маркерными мутациями в нем, т.к. генетицин влияет на работу рибосомального комплекса и может вызывать всякие супрессорные эффекты (напримен на стоп-мутации) или на оборот стопить чегоньть. Конценторацию можно повысить раза в 2 легко. Эффективность партий антибиотика по массе может быть от 20 до 60% - так что надо каждую тестировать. Я в конце концов утомился и забросил его. А что делаем то конкретно?

Ну, уважаемый ВСК, не знаю почему G418 и дрожжи - это странное сочетание. Я бы сказал Это классика метода по интеграции ПЦР-кассет в геном. Если G418 действительно такой "неровный", как Вы говорите, то вполне возможно, что легче работать с аминокислотными маркерами. Хотя, согласитесь, всегда лучше что-то добавить в среду, чем изымать из нее. ;-)
Так исторически сложилось, что единственным свободным маркером в штамме, с которым у нас работают, остался только Kan. Работают у нас с теломеразой дрожжей. Вот.

F1 Removal is a well known movers and packers company all over the UK.

Removals CompanyOffice Removal in LondonRemovals Company in LondonMoving Company in LondonMoving CompanyMovers in LondonMan and Van in LondonHouse Removals in LondonHouse RemovalsPackers and movers in LondonRelocation Company in LondonCommercial RemovalsLocal Movers[/URL [URL=https://f1removals.co.uk/long-distance-mover/]Long Distance Mover