Итак, мне нужно воспроизвести этот опыт с имеющимся у меня оборудованием
Что имеют авторы статьи:
1) платиновые электроды
2) нерв
3) маркер DiI
4) Блок питания для электрофореза EC-400
5) масло
В статье они прикладывали электроды непосредственно к нерву по обеим сторонам, и давали напряжение (оптимум до 48V/см). Нерв был помещен в масло (изолятор), таким образом ток шел только через нерв. Смысл был в том что DiI (флуоресцентный липид) это катион и под действием электрического поля он будет двигаться от анода (+) к катоду (-) по мембране, если маркер DiI помещен у анода. В статье есть ньюанс - силу тока авторы в амперах не указали (и не контролировали?!!! как мне автор статьи написал), но их блок питания дает максимум 200мА.
Что я имею в наличии:
1) Стальные электроды
2) образцы мышиного мозга
3) маркер DiI
4) Блок питания 0-5А (шаг 10мА), 0-30V (шаг 10мV), сила тока регулируется, напряжение регулируется
5) масло
Я попробовал воспроизвести опыт прямо как в статье, но со стальными электродами (платиновых нет и не будет), но мозг расплавился уже на 10мА (минимальная сила тока).
Я модифицировал схему, сделал как классический электрофорез, т.е взял две ванночки, залил физраствором, поместил туда стальные электроды, сделал мостик из агар-агара с мозгом внутри (агар-агаровый блок), и по бокам блока прикрепил фильтровалку, которая одним концом контактирует с агар-агаром, а другим с физраствором (замкнул цепь). На значениях 10мА вроде мозг не плавится, хотя электролиз в растворе идет что парит.
но есть проблемы - я электрофорез сам никогда не делал, и не уверен что у меня все правильно собрано, все мои знания о нем книжные. Хотел бы мнения спецов об своей схеме эксперимента, какие подводные камни и т.п. может и исходную схему авторов можно поправить под мои условия? Меня парит вот что - напряжение на фильтровалке по краям блока (мерил тестером) выходит почти нулевое, хотя в растворе 30V, и сила тока не увеличивается регулятором (10мА), но увеличивается до 50-70мА если я почти вплотную вручную приближаю мозг к стальным электродам. Так что я даже не уверен идет у меня ток через мозг или нет. может агаровый блок и не нужен, может напрямую фильтровалку к срезам мозга приложить что бы ток не гасился агар-агаром? все это надо проверять конечно но я уже 5 образцов потерял, и как то больше бы не хотелось. В общем жду мнений, советов, вопросов.