(Vadim Sharov @ 12.03.2020 14:54)
1. Насколько Вам необходим именно HEPES? L929 устойчивая линия. Если пересевать 1:3, то дыхания клеток вполне хватит для кондиционирования среды. Закрывайте плотно пробку флакона.
Если хотите HEPES - Оптимальные значения концентраций в составе культуральных сред 15-25мМ. Я использовал 20.
Можно купить стерильный 1М раствор ииспоьзовать как сток. Можно приготовить и стериллизовать фильтрованием.
В любом случае CО2 более физиологичен и не так дорог. Есть клетки для которых HEPES токсичен. Поэтому HEPES применяется в коротких экспериментах, а не для культивирования.
Важным этапом подготовки к работе является мытье посуды.
Использованная стеклянная посуда замачивается в моющем растворе в теплой воде на несколько часов. Посуда тщательно отмывается ершиком. Затем трижды споласкивается в большом объеме дистиллированной воды. После этого посуда высушивается и стерилизуется.
Также поступают c пеналами, где находятся пипетки.
Перед стерилизацией полость пипетки многократно промывается горячей водой с моющим средством. Пипетки кипятятся в этом растворе, затем трижды промываются большим объемом дистиллированной воды и сушатся.
! 