Всем привет.
Есть дурацкий вопрос от неспециалиста.
При формировании лестницы Сенгера в геле разделяются по длине синтезированные и оборванные на дидезоксирибонуклеотиде цепи ДНК. При этом разница между цепями может быть и 1, и 2 bp. Для разделения в геле важны масса молекулы, заряд, но разница в 2 bp вряд ли сильно влияет на данные параметры.
Каким образом получается, что две цепи ДНК с разницей в 2 bp попадают на столь отличимо видимые полосы на геле, типа как на прикрепленной картинке. Как этого удается добиться?
 
| |
[ Вход | Регистрация ]
|
Вопрос по лестнице Сенгера
testun, 13.04.2020 12:11
testun, 13.04.2020 12:24
Картинку не прикрепилась. Тут она.
MMM, 13.04.2020 13:31
В геле важны масса молекулы, заряд, но разница в 2 bp вряд ли сильно влияет на данные параметры.
Это ложное утверждение. Хорошо, что все таки "вряд-ли" вставили, что бы можно было откат сделать.
Все относительно! Представьте себе молекулу из одного нуклеотида и из трех нуклеотидов. Как думаете сильно скажется разность в 2bp на подвижности этих двух молекул.
Это предельный случай, утрированный специально для понимания.
На самом деле проблема разрешения ПААГ существует.
Именно поэтому длина чтения в Сэнгере и Максаме-Гилберте ограничена где-то 200-300bp, более длинные фрагменты форез уже не разрешает.
Та же проблема в аплайдовских капиллярниках. Именно разрешением капиллярного фореза ограничена длина прочтения(где-то 700-800bp)
VeroE6, 13.04.2020 13:33
(MMM @ 13.04.2020 14:31)
Это ложное утверждение. Хорошо, что все таки "вряд-ли" вставили, что бы можно было откат сделать.Все относительно! Представьте себе молекулу из одного нуклеотида и из трех нуклеотидов. Как думаете сильно скажется разность в 2bp на подвижности этих двух молекул.
Это предельный случай, утрированный специально для понимания.
На самом деле проблема разрешения ПААГ существует.
Именно поэтому длина чтения в Сэнгере и Максаме-Гилберте ограничена где-то 200-300bp, более длинные фрагменты форез уже не разрешает.
Та же проблема в аплайдовских капиллярниках. Именно разрешением капиллярного фореза ограничена длина прочтения(где-то 700-800bp)
VeroE6, 13.04.2020 13:45
(MMM @ 13.04.2020 14:31)
Это ложное утверждение. Хорошо, что все таки "вряд-ли" вставили, что бы можно было откат сделать.Все относительно! Представьте себе молекулу из одного нуклеотида и из трех нуклеотидов. Как думаете сильно скажется разность в 2bp на подвижности этих двух молекул.
Это предельный случай, утрированный специально для понимания.
На самом деле проблема разрешения ПААГ существует.
Именно поэтому длина чтения в Сэнгере и Максаме-Гилберте ограничена где-то 200-300bp, более длинные фрагменты форез уже не разрешает.
Та же проблема в аплайдовских капиллярниках. Именно разрешением капиллярного фореза ограничена длина прочтения(где-то 700-800bp)
ммм решил занятся популяризацией науки на старости лет
testun, 13.04.2020 15:39
(MMM @ 13.04.2020 14:31)
Это ложное утверждение. Хорошо, что все таки "вряд-ли" вставили, что бы можно было откат сделать.Все относительно! Представьте себе молекулу из одного нуклеотида и из трех нуклеотидов. Как думаете сильно скажется разность в 2bp на подвижности этих двух молекул.
Это предельный случай, утрированный специально для понимания.
На самом деле проблема разрешения ПААГ существует.
Именно поэтому длина чтения в Сэнгере и Максаме-Гилберте ограничена где-то 200-300bp, более длинные фрагменты форез уже не разрешает.
Та же проблема в аплайдовских капиллярниках. Именно разрешением капиллярного фореза ограничена длина прочтения(где-то 700-800bp)
Спасибо за ответ.
Может быть подскажете какое-нибудь исследование, показывающее, что разрешающая способность
полиакриламидного геля определенной концентрации 1 нуклеотид? То есть, что он разделяет, например, цепи 156 и 157 bp.
VeroE6, 13.04.2020 16:06
(testun @ 13.04.2020 16:39)
Спасибо за ответ.Может быть подскажете какое-нибудь исследование, показывающее, что разрешающая способность
полиакриламидного геля определенной концентрации 1 нуклеотид? То есть, что он разделяет, например, цепи 156 и 157 bp.
гель 2 метра радирактивная метка ПАГ чем тверже тем лутчше как молодой мужской члнен
testun, 13.04.2020 16:39
(VeroE6 @ 13.04.2020 17:06)
гель 2 метра радирактивная метка ПАГ чем тверже тем лутчше как молодой мужской члненСпасибо большое. Про "как член" все очень понятно и доступно написано.
Может быть поможете со ссылкой на исследование, в котором пришли к выводу, что на геле с определенными свойствами можно разделить две цепи с разницей в 1 нуклеотид? Очень интересует методика, посредством которой пришли к такому выводу.
MMM, 13.04.2020 19:54
Откройте старое руководство Маниатиса "Молекулярное клонирование" за 84г(есть в сети). Там подробнейшим образом прописан протокол секвенирования по Максаму-Гилберту, в том числе и условия электрофореза, которые идентичны с Сэнгеровским гелем. Посмотрите литературу к статье секвенирование по Сэнгеру в Wiki.
Я понимаю, что вы не верите. Но для человека хотя бы раз получившего сиквенсовый гель, ваши сомнения кажутся глупыми и смешными.
Я понимаю, что вы не верите. Но для человека хотя бы раз получившего сиквенсовый гель, ваши сомнения кажутся глупыми и смешными.
VeroE6, 13.04.2020 20:15
(MMM @ 13.04.2020 20:54)
Откройте старое руководство Маниатиса "Молекулярное клонирование" за 84г(есть в сети). Там подробнейшим образом прописан протокол секвенирования по Максаму-Гилберту, в том числе и условия электрофореза, которые идентичны с Сэнгеровским гелем. Посмотрите литературу к статье секвенирование по Сэнгеру в Wiki.Я понимаю, что вы не верите. Но для человека хотя бы раз получившего сиквенсовый гель, ваши сомнения кажутся глупыми и смешными.
VeroE6, 13.04.2020 20:18
(MMM @ 13.04.2020 20:54)
Откройте старое руководство Маниатиса "Молекулярное клонирование" за 84г(есть в сети). Там подробнейшим образом прописан протокол секвенирования по Максаму-Гилберту, в том числе и условия электрофореза, которые идентичны с Сэнгеровским гелем. Посмотрите литературу к статье секвенирование по Сэнгеру в Wiki.Я понимаю, что вы не верите. Но для человека хотя бы раз получившего сиквенсовый гель, ваши сомнения кажутся глупыми и смешными.
VeroE6, 13.04.2020 20:22
(MMM @ 13.04.2020 20:54)
Откройте старое руководство Маниатиса "Молекулярное клонирование" за 84г(есть в сети). Там подробнейшим образом прописан протокол секвенирования по Максаму-Гилберту, в том числе и условия электрофореза, которые идентичны с Сэнгеровским гелем. Посмотрите литературу к статье секвенирование по Сэнгеру в Wiki.Я понимаю, что вы не верите. Но для человека хотя бы раз получившего сиквенсовый гель, ваши сомнения кажутся глупыми и смешными.
мммыч это теперь ненавязчивое прсылание накуй
VeroE6, 13.04.2020 20:30
(MMM @ 13.04.2020 20:54)
Откройте старое руководство Маниатиса "Молекулярное клонирование" за 84г(есть в сети). Там подробнейшим образом прописан протокол секвенирования по Максаму-Гилберту, в том числе и условия электрофореза, которые идентичны с Сэнгеровским гелем. Посмотрите литературу к статье секвенирование по Сэнгеру в Wiki.Я понимаю, что вы не верите. Но для человека хотя бы раз получившего сиквенсовый гель, ваши сомнения кажутся глупыми и смешными.
когда воротимся мы в Протденд
VeroE6, 13.04.2020 21:32
(MMM @ 13.04.2020 20:54)
Откройте старое руководство Маниатиса "Молекулярное клонирование" за 84г(есть в сети). Там подробнейшим образом прописан протокол секвенирования по Максаму-Гилберту, в том числе и условия электрофореза, которые идентичны с Сэнгеровским гелем. Посмотрите литературу к статье секвенирование по Сэнгеру в Wiki.Я понимаю, что вы не верите. Но для человека хотя бы раз получившего сиквенсовый гель, ваши сомнения кажутся глупыми и смешными.
мммыч все читать
VeroE6, 13.04.2020 21:34
(MMM @ 13.04.2020 20:54)
Откройте старое руководство Маниатиса "Молекулярное клонирование" за 84г(есть в сети). Там подробнейшим образом прописан протокол секвенирования по Максаму-Гилберту, в том числе и условия электрофореза, которые идентичны с Сэнгеровским гелем. Посмотрите литературу к статье секвенирование по Сэнгеру в Wiki.Я понимаю, что вы не верите. Но для человека хотя бы раз получившего сиквенсовый гель, ваши сомнения кажутся глупыми и смешными.
на русском или на английсском какой том их там 4
VeroE6, 13.04.2020 21:44
(MMM @ 13.04.2020 20:54)
Откройте старое руководство Маниатиса "Молекулярное клонирование" за 84г(есть в сети). Там подробнейшим образом прописан протокол секвенирования по Максаму-Гилберту, в том числе и условия электрофореза, которые идентичны с Сэнгеровским гелем. Посмотрите литературу к статье секвенирование по Сэнгеру в Wiki.Я понимаю, что вы не верите. Но для человека хотя бы раз получившего сиквенсовый гель, ваши сомнения кажутся глупыми и смешными.
Li-Cor, 15.04.2020 20:47
(testun @ 13.04.2020 13:11)
Всем привет.Есть дурацкий вопрос от неспециалиста.
При формировании лестницы Сенгера в геле разделяются по длине синтезированные и оборванные на дидезоксирибонуклеотиде цепи ДНК. При этом разница между цепями может быть и 1, и 2 bp. Для разделения в геле важны масса молекулы, заряд, но разница в 2 bp вряд ли сильно влияет на данные параметры.
Каким образом получается, что две цепи ДНК с разницей в 2 bp попадают на столь отличимо видимые полосы на геле, типа как на прикрепленной картинке. Как этого удается добиться?
watchesbiz, 28.10.2021 07:09
watchesonline89, 25.12.2022 10:17
Это — лёгкая версия форума. Чтобы попасть на полную, щелкните здесь.