Asterix, 08.07.2020 21:17
как хакануть [pJet1.2] ?
Что лучше ПЦР или штамм купить ?
Тут дело такое шеф прикупил наборчик для тупого клонирования ПЦР продуктов ... ну нам оно надо .. у нас ГМО мхи идут и для Криспа с Каспом надо точно знать сиквенс геномный ... а там разнообразие жуткое , вообщем без сиквенса никак , а поскольку там и аллельное разнообразие огромное то надо таки клонировать ПЦР-продукты перед сиквенсом . иначе каша получается на сивенсе , когда несколько аллелей в смеси присутсвуют.,
Вообщем посмотрел я на этот кит и удивился цене .. собственно за что такие деньги?
Вот подумал а что если я этоит вектор просто амплифицирую и буду так же использовать как и оригинальный .. ну там конечно мень;ше будет еффективность , поскольку ПЦР продукт же , неметилированный .. Но по-идее должно не сильно хуже работать. Ну чего там 3кб вектор и вставки это по 1кб максимум.
Или же лучше прикупить специальный штаммм в котором можно этот вектор размножать?
Asterix, 08.07.2020 21:56
Вот написал праjмеры к такому проекту ..
VK 044 revers + EcoRV 5'- AGGCCTGATATCTTGCTGAAAAACTCGAGCCATCC
VK 045 forward + EcorV 5- AGGCCTGATATCTTTCTAGAAGATCTCCTACAATATTCTC
Asterix, 08.07.2020 22:27
Могу кстати поделиться и вектором .. ну когда я его амплифицирую конечно и проверю что оно работает не хуже оригинала .
Мне право не жалко , не все же ТермоФишеровскому коту масленница .. Надо и на биохакеров внимание обращать...
Asterix, 08.07.2020 22:31
хготя по- правде говоря я вообще
всю систему переделаю ... ну идея такая же но исполнение другое совсем, вместо этой нуклеазы я возьму ГФП .. И буду просто видеть клоны со вставкой . У нас для этого отличный гаджет есть.
Даже если их там всего несколько на 1000 пустых .. я их все равно увижу и преспокойно выделю плазмиду.
X34, 09.07.2020 15:22
мАгу готовую плазмиду выслать, давно взломали
этот ваш пиджет
Asterix, 09.07.2020 22:48
Да чего там ломать . вставил по [EcoRV] 1 кб так чтоб там на концах половинки сайта этого были .. и реазмножай сколько угодно и вырезай вектор, и из геля знай себе чисти..
Впрос-то был с тайным намерением ...
А вдруг кто скажет что .. а у нас во дворе есть плазмидка одна ,... и куда как круче этого [pJet]
Вот что я хотел услышать в ответ ... Ну и подробный рассказ чем круче и почему круче ... /// А уж копию я сам сделаю , може и не высылать., главное идея.