Наверно, этот вопрос звучит очень трогательно спустя почти 60 лет после создания солевого раствора Эрла. Я понимаю, что использование бикарбонатного буфера требует 5% содержания СО2 в атмосфере, я также понимаю, что именно эта буферная система является доминирующей буферной системой плазмы крови и межтканевой жидкости и ее использование в искусственной среде наиболее физиологично.
Но почему клетки погибнут в среде с буфером на основе HEPES, если ее не загазовать CO2? Если отвлечься от бикарбонатного буфера, зачем добавляют бикарбонат в среду, какова роль карбонат-иона в метаболизме клетки (он ведь и так сам образуется).
Может быть, определенная концентрация его необходима, чтобы поддерживать определенное равновесие процессов дыхания?
Или необходимость добавления бикарбоната в среду установлена эмпирически, и теоретического обоснования не имеет?
Помогите разобраться.

Я другой guest, но присоединяюсь к заданному выше вопросу. Кроме того, добавляю свой вопрос. Есть ли методики культивирования клеток без специальных CO2-инкубаторов в обычных термостатах?

Есть ли методики культивирования клеток без специальных CO2-инкубаторов в обычных термостатах?
Не знаю насколько это применимо в Вашем случае, но когда нам для культивирования клеток нужна была концентрация СО2 10-15%, мы обходились следующей конструкцией:
чашки петри, планшеты или что Вы там используете помещаете в эксикатор, в нем же укрепляете кусеок свечки и поджигаете ее, крышку эксикатора герметично (с вазелином) притираете, можно дополнительное ее зафиксировать по краям лейкопластырем, и в термостат. Несколько неудобно, но эффективно.

На заре юнности своей, когда культуральные 96-луночные плашки приходилось мыть и использовать по несколько раз и не было СО2-инкуб., я пользовался свечей в эксикаторе (шутка), а реально возьмите среду L-15 (Лейбовица).
Cow_Doc

В этой среде можно культивировать клетки без CO2-инкубатора?

1.CO2-бикарбонатная система является нормальной буферной системой крови млекопитающих. Система очень слабая, т.е. имеет низкое значение рКа = 6,1. Но этого вполне достаточно, при наличии СО2 в газовой фазе.
2. Увеличение буферной емкости достигается использованием HEPES, Tris etc. При этом необходимо отметить, что при длительном культивировании эти буферы, по крайней мере, трис и глицил-глициновый - токсичны. Но все равно необходимость в СО2 не отпадает.
3. Среда L-15 -использует буферную емкость свободных аминокислот, глюкоза заменена на пируват и галактозу. Гидрокарбонат натрия исключен из состава среды в оригинальной прописи.
4. В этой среде можно культивировать клетки без СО2-инкубатора, но в открытых сосудах.
5. Среды на основе раствора Хенкса (4 мМ бикарбоната) уравновешиваются воздухом.
5. Есть мнение, что для некоторых типов клеток СО2 - просто жизненно важен.

И что, в среде L-15 можно вести культуры клеток млекопитающих вне СО2-инкубатора? Не верю. Я всегда думал, что L-15 - среда для временного передерживания клеток. В ней вроде бы хорошо идут клеточные линии из эмбрионов хладнокровных и птиц, то есть для которых СО2 в атмосфере не физиологичен. А так я думаю 3-5 дней что-то и протянет.
Это речь о прописи Лейбовица идет, а то ведь часто в L-15 добавляют бикарбонат или HEPES и пр. А воообще, в L-15 есть компоненты фосфатного буфера, это тоже имеет значение. Так и в среде Дюльбекко тоже клетки млеков можно день-два держать на воздухе, особенно некоторые клеточные типы (как я слышал).
Я заблуждаюсь?

Честно говоря такой необходимости, как использовать среду L-15, для того чтобы исключить СО2, у меня никогда не было. Но работать с ней приходилось много. Она действительно прекрасно подходит для кратковременного переживания культур клеток млекопитающихся, дней 8-10. Дальше (по времени) - просто не экспериментировал.
Но есть простой выход: попробовать.
Сам обязательно попробую, потом расскажу. И Вам предлагаю.
Идею с эксикатором развиваю дальше: можно в донную часть вакуумного эксикатора поместить кусочек твердой СО2 (можно достать на комбинате производящем мороженное, либо получить самостоятельно, из баллона с СО2). После чего, приспособить продувку воздухом, фильтрованным через 0,22 мкм фильтр. В свое время мы так работали. Получалось.

Есть еще один вариант "СО2-инкубатора":
Небольшой герметично закрываемый оргалитовый бокс, оборудованный двумя штуцерами (напр., продукт ИБП, Пущино, размером ок. 12*25*25 см, или самодельный, лучше поменьше), в который помещаются планшеты или др. для культивирования, тщательно продувается выдыхаемым Вами воздухом через один из штуцеров. Желательно делать это через стерилизующий фильтр, хотя некоторые успешно этим пренебрегают. Дешево, но эффективно.

И сколько времени так продувать?

И сколько времени так продувать?

Позволю себе ответить за Aleksm: продувать до тех пор, пока индикатор pH в среде (феноловый красный)не станет алого цвета.
Раз уж тут все доходят до маразма и вспоминают молодость, позвольте и мне. Я предлагаю вместо пущинской пластиковой коробочки (которую предприятие Биоприбор в своем каталоге гордо называет проточным СО2-инкубатором) использовать стеклянные пузырьки с резиновыми пробками. Когда-то так работали с эмбрионами млекопитающих.
В пузырек малого объема (2-10 мл) наливаете (все стерильно, конечно) среду и помещаете объект (в нашем случае были эмбрионы мыши). Закрываете резиновой пробкой и очень хорошо обматываете ее парафильмом (еще лучше strechfilm). Прокалываете пробку двумя иглами от щприца. На одну одеваете фильтр 0,22 мкм и шланг от баллона СО2, вторая остается свободной, через нее воздух будет уходить. Продуваете СО2 до тех пор пока индикатор не станет соответствующего цвета, это очень недолго. ВАЖНО, чтобы иголки не были опущены в среду, а находились над жидкостью (иначе все вспенится). Потом иглы вытаскиваете и еще раз закупориваете все парафильмом. Пузырек - в термостат.
Я думаю, можно в шланг и ртом дуть (2-3 минуты), только фильтр не забудьте. А вместо пузырьков можно матрасики использовать, только к ним надо резиновые пробки подобрать и чтобы все герметично было.
Эх, Россия!

Да, уж! Действительно "до маразма"!
Главное, когда будете дуть ртом, не делать этого сразу после праздников. Дабы перегарный ацетальдегид не "спортил" нежную культуру.

F1 Renovations is one of the leading renovation companies all over the UK. We provide painting and decorating services, including all types of decoration like house renovation, kitchen renovation, bathroom renovation, tiling, flooring, etc. We provide quality service at cheap rates.

Removals Company | Removals Company | Office Removal in London | Office Removals London | Relocation Companies London | Removals Company in London | Moving Company in London | Moving Company | Movers in London | Man and Van in London | House Removals in London | House Removals | Packers and movers in London | Packers and movers London | Movers and Packers in London | Relocation Company in London | Commercial Removals | Local Movers | Long Distance Mover | Long Distance Movers | Long Distance Moving Company | renovations | london renovations | renovation companies in london | renovations company london | house renovation in london | Kitchen renovation london | Kitchen fitting london | Kitchen fitters in London | bathroom renovations london | painters and decorators in london | painting and decorating in london | painters in london | london decorators | vinyl tile flooring | vinyl flooring | laminate flooring | parquet flooring | wood flooring | parquet flooring london | luxury vinyl flooring | lvt flooring | wood flooring london | karndean flooring | herringbone flooring | laminate flooring london | amtico flooring | bathroom floor tiling | bathroom tiling | kitchen tiling | floor tiling | porcelain tiling | terrazzo tiling

On the network’s flagship aff 1688evening newscast, ทางเข้าufa1688Xi was shown wearing ufabet เข้า สู่ระบบa face mask and viewing ufa1688the displays at the Beijing ราคาบอลExhibition Hall where photos สล็อตออนไลน์of himself featured heavily. UFA1688He was accompanied by Premier ลิงค์รับทรัพย์Li Keqiang and other top leaders, แฮนดิแคปincluding all members of the party’s บอลสเต็บsupreme Politburo Standing Committee.