MolBiol.ru > Методы > PCR > Влияние различных веществ на PCR | |
|
ГЛАВНАЯ ·
ПРОЕКТ ·
СПРАВОЧНИК ·
МЕТОДЫ ·
РАСТВОРЫ ·
РАСЧЁТЫ ·
ЛИТЕРАТУРА ·
ЗАДАЧИ ·
ФИРМЫ ·
Хеликон · Диаэм · ИнтерЛабСервис · Beckman Coulter · SkyGen · ОПТЭК · BIOCAD · Евроген · Синтол · БиоЛайн · Sartorius · Химэксперт · СибЭнзим · Tecan · Даниес · НПП "ТРИС" · Биалекса · ФизЛабПрибор · Genotek · АТГ Сервис Ген · Биоген-Аналитика
|
Дополнения, комментарии, вопросы Цыгира /28.02.2006 16:54/
Опечатка BSA 10 µg/ µl ~0.1 µg/ml стабилизация фермента надо BSA 10 µg/ µl ~0.1 µg/µl стабилизация фермента гость: G /28.02.2006 18:01/
BSA 10 µg/ µl - стабилизация фермента? Не многовато BSA? Гость /16.11.2006 12:48/
HELP! Уважаемые коллеги! У меня проблема. Для сиквенса 16s ставила ПЦР с праймерами f27-r1392 и f530-r1525. Получала толстый фрагмент, но под ним шла паразитная полоска с низкой концентрацией в каждом случае. Элюировала толстую полосу из геля и ставила ре-ПЦР с теми же праймерами и еще с внутренними: с матрицы f27-r1392 ставила с праймерами 40-1392, 357-1392, с матрицы f530-r1525 с праймерами 530-1492. Во всех случаях та же самая история - идет дополнительная полоса. Вряд ли это внутреннее праймирование, но я боюсь, что при сиквенсе будет ерунда. Насколько плачевна моя ситуация? Может, я гоню волну? Заранее благодарна за ответ. Guest /17.11.2006 12:26/
Цыгира - такая концентрация БСА - это в стеклянных капиллярах на Lightcycler Guest /17.11.2006 12:32/
цигира - почитай эту статейку 1: Anal Biochem. 1990 May 1;186(2):328-31. Links Minimizing the time required for DNA amplification by efficient heat transfer to small samples. * Wittwer CT, * Fillmore GC, * Garling DJ. Department of Pathology, University of Utah Medical School, Salt Lake City 84132. Hot-air temperature cycling of 1- to 10-microliters samples in glass capillary tubes can amplify DNA by the polymerase chain reaction in 15 min or less. A rapid temperature cycler of low thermal mass was constructed to change sample temperatures among denaturation, annealing, and elongation segments in a few seconds. After 30 cycles of 30 s each, a 536-bp beta-globin fragment of human genomic DNA was easily visualized with ethidium bromide on agarose gels. With rapid cycling, amplification yield depended on polymerase concentration. The time required for DNA amplification can be markedly reduced from prevailing protocols if appropriate equipment and sample containers are used for rapid heat transfer to the sample. PMID: 2363506 [PubMed - indexed for MEDLINE] Sveta Tim /28.02.2007 18:37/
Пожалуйста, подскажите. Концентрацию ДНК, выделенной из крови с гепарином, увеличить или уменьшить, если при нормальной концентрации не идут реакции? Guest /28.02.2007 21:11/
Разбавлять до бесконечности с кратностью два раза - кто кого победит, ингибирующее влияние гепарина на ПЦР или количество матрицы в среде. Потом расскажете на форуме и ПЦР-ный мир отблагодарит Вас. Solaris /01.03.2007 18:41/
Еще одно вещество, повышающее эффективность PCR, - 2-пирролидон. Рабочая концентрация - 3%. Гость /14.03.2008 17:41/
Привет! как избавиться от неспецифики при ПЦР??? Что только уже не пробовала? Подскажите!Заранее спасибо! Ъ /14.03.2008 18:01/
(Гость @ 14.03.2008 16:41) Привет! как избавиться от неспецифики при ПЦР??? Что только уже не пробовала? Подскажите!Заранее спасибо! Правильно выбранные праймеры работают без неспецифики даже бе хотстарта и волшебных добавок. Праймеры в студию и "чистосердечные признания"! Guest /14.03.2008 18:11/
(Ъ @ 14.03.2008 17:01) Правильно выбранные праймеры работают без неспецифики даже бе хотстарта и волшебных добавок. Праймеры в студию и "чистосердечные признания"! а иначе -расстрел на месте без последнего "Прощай" Ъ /14.03.2008 18:19/
(Гость @ 14.03.2008 16:41) Привет! как избавиться от неспецифики при ПЦР??? Что только уже не пробовала? Подскажите!Заранее спасибо! Вина красного сухого пробовали? Советую не более двух бокалов. Это у меня такие тяпничные советы как ПЦР улучшить. Guest /14.03.2008 18:23/
(Ъ @ 14.03.2008 17:19) Вина красного сухого пробовали? Советую не более двух бокалов. Это у меня такие тяпничные советы как ПЦР улучшить. А у тебя что - уже рабочий день закончился ? Ъ /14.03.2008 18:30/
(Guest @ 14.03.2008 17:23) А что, хочешь предложить сообразить на троих? Конечному продукту только дай знак - всегда готов. Гость /05.06.2008 07:22/
а как развести DEPC если есть раствор 1 мл (Медиген) а конц не известна? плиз Ъ /05.06.2008 10:03/
(Гость @ 05.06.2008 06:22) Сначала в этаноле, 1 или 10%. После растворения в воде, автоклавировать. Следовые количества DEPC сильно ингибируют RT и PCR. Гость /08.08.2008 09:08/
Kuzminka: Люди добрые, подскажите, почти целый год бьюсь над ПЦР-слабая наработка (еле видимая)продукта амплификации. Что делать? Гость /08.08.2008 09:15/
Кuzminka :'( : кто-нибудь когда-нибудь пользовался набором для выделения ДНК, а именно: Genomic DNA Purification Kit K0512 фирмы "Fermentas"? Проблема: после добавления преципитационного раствора к р-ру, содержащему ДНК и после центрифугир-я должен образоваться супернатант, но его мы не видим, мы чо слепые или чо??? Заранее спасибо за помощь! :) Guest /08.08.2008 10:21/
(Гость @ 08.08.2008 08:15) Кuzminka :'( : кто-нибудь когда-нибудь пользовался набором для выделения ДНК, а именно: Genomic DNA Purification Kit K0512 фирмы "Fermentas"? Проблема: после добавления преципитационного раствора к р-ру, содержащему ДНК и после центрифугир-я должен образоваться супернатант, но его мы не видим, мы чо слепые или чо??? Заранее спасибо за помощь! Т.е. хотите сказать, что не видите преципитат (осадок с ДНК)? А супернатант не видеть невозможно, даже если он прозрачный и бесцветный! . Guest /11.08.2008 12:09/
там, видимо, какой-то специфический днк-содержащий супернатант должен быть Guest /11.08.2008 13:49/
(Guest @ 11.08.2008 11:09) Если это после хлороформа, да. А если после "преципитационного раствора", нет: Гость /12.08.2008 12:38/
Kuzminka: да, в том то и дело, что там должен образоваться осадок ДНК, но я его не вижу. В чем причина? Guest /12.08.2008 13:38/
(Гость @ 12.08.2008 11:38) Kuzminka: да, в том то и дело, что там должен образоваться осадок ДНК, но я его не вижу. В чем причина? Если Вы хотите увидеть осадок геномной ДНК из 200 мкл крови, то зря стараетесь. Не ищите преципитат ДНК, а делайте все по протоколу до конца. Угораздило же Вас купить неудобный набор для выделения ДНК из микрообъема крови. Это протокол удобен при выделении ДНК из больших объемов, более 1 мл крови. Гость /14.08.2008 12:54/
Kuzminka: спасибо,конечно, за хорошие советы, но я работаю с растительным геномом. Как быть в этом случае? Заранее благодарю! Yuri K /14.08.2008 15:58/
Just add carrier for precipitation, like MB-grade glycogen, and forget about it. Гость /15.08.2008 09:00/
What is "MB-grade glyconen"? Translate in Russia, please! Гость /15.08.2008 09:05/
What is "MB-grade glyconen"? Translate in Russian, please! Guest /15.08.2008 09:44/
(Гость @ 15.08.2008 08:05) Гликоген для мол.биол. Специальный, для соосаждения ДНК и РНК, без ДНК-аз и РНК-аз. Yuri K /15.08.2008 16:08/
GlycoGen, sorry for the typo. Гость /18.08.2008 07:24/
Kuzminka: Thanks! А ск-ко вешать в граммах? Т.е.сколько его необходимо добавлять7 Заранее благодарю! Yuri K /18.08.2008 15:50/
(Гость @ 18.08.2008 06:24) Kuzminka: Thanks! А ск-ко вешать в граммах? Т.е.сколько его необходимо добавлять7 Заранее благодарю! With glycogen from IVGN (SKU# 10814-010) which is 20 ug/uL, just add 1 uL per Eppendorf (i e, 0.5-1.5 mL final volume) precipitation. Tip: Make sure you vortex your DNA solution after you added glycogen. metrim /28.04.2015 00:39/
А есть ли какие то компоненты или факторы могут влиять на "посадку праймера" на матрицу? То что приведено - влияет скорее на функционирование полимеразы, а что может оказывать влияние, мешать комплиментарному связыванию праймера с матрицей, искажать процесс? Guest /29.04.2015 13:32/
ПЦРу очень помогают crowding агенты - типа трегалозы, высокомолекулярных ПЭГов. из недавнего замечено, что RecA белочек тоже помогает убрать неспецифику. а в обсчем - удачные праймеры, оптимальный буфер и полимераза (или смесь) творят чудеса... watchesbiz /26.11.2021 07:49/
watchesonline89 /27.12.2022 09:06/
|
ГЛАВНАЯ ·
ПРОЕКТ ·
СПРАВОЧНИК ·
МЕТОДЫ ·
РАСТВОРЫ ·
РАСЧЁТЫ ·
ЛИТЕРАТУРА ·
ЗАДАЧИ ·
ФИРМЫ ·
Хеликон · Диаэм · ИнтерЛабСервис · Beckman Coulter · SkyGen · ОПТЭК · BIOCAD · Евроген · Синтол · БиоЛайн · Sartorius · Химэксперт · СибЭнзим · Tecan · Даниес · НПП "ТРИС" · Биалекса · ФизЛабПрибор · Genotek · АТГ Сервис Ген · Биоген-Аналитика
|