Выделение ДНК из мух (фенол)


MolBiol.ru > Методы > Геномная ДНК > Выделение ДНК из мух (фенол)

ГЛАВНАЯ · ПРОЕКТ · СПРАВОЧНИК · МЕТОДЫ · РАСТВОРЫ · РАСЧЁТЫ · ЛИТЕРАТУРА · ЗАДАЧИ · FULL TEXT · ОРГ.ВОПРОСЫ · WEB
ФИРМЫ · КАРТА САЙТА · COFFEE BREAK · КАРТИНКИ · РАБОТЫ И УСЛУГИ · БИРЖА ТРУДА · ФОРУМЫ · ·

Zbio-wiki

Хеликон · Диаэм · ИнтерЛабСервис · Beckman Coulter · SkyGen · ОПТЭК · BIOCAD · Евроген · Синтол · БиоЛайн · Sartorius · Химэксперт · СибЭнзим · Tecan · Даниес · НПП "ТРИС" · Биалекса · ФизЛабПрибор · Genotek · АТГ Сервис Ген · Биоген-Аналитика

NG SEQUENCING · ЖИЗНЬ РАСТЕНИЙ · БИОХИМИЯ · ГОРОДСКИЕ КОМАРЫ · А.А.ЛЮБИЩЕВ · ИСТОРИЯ ЗООМУЗЕЯ

Фенольный метод выделения DNA из мух

взвесить мух;
в керамической ступке заморозить мух в жидком азоте, растереть в тонкий порошок;
долить в ступку жидкий азот, добавить DB из расчета 1.2ml на 100mg, растереть;
перенести замороженный порошок в пробирку;
56^oС, > 3h;
мягко экстрагировать равным объёмом фенола;
ЦФ в два этапа:

(1) 1.5krpm, NT, 5',
(2) 4.5krpm, NT, 10';

мягко экстрагировать Ф:Х, Х, (ЦФ 4.5krpm, NT, 10');

Осаждение EtOH.

добавить:

AcNH₄ 10M 1/4V,
EtOH (96%) 2V;

комочек DNA прополоскать, перенеся типом в 70% EtOH;
подсушить (не пересушить!), растворить в TE или H₂O (из расчёта ~1µl/муху).

Диализ.

поместить DNA в диализный мешок;
диализ: ~сутки против нескольких смен TE.

MolBiol.ru: http://molbiol.ru
e-mail: redactor@molbiol.ru
просмотров: 14103

Комментарии

Общие

Содержание DNA в мухах: самец ~0.75µg, самка ~1µg.

По пунктам

п. 1.

Или сосчитать, 1 муха весит ~1mg.

п. 2, 3.

Аккуратно выливайте жидкий азот в ступку (из небольшого пластикового стаканчика), иначе разлетятся и растертые мухи и не растертые.
Обязательно работайте под хорошей тягой. Растертые в пыль мухи могут очень быстро сделать вас аллергиком.
При растирании мух с DB получается мелкодисперсная суспензия. При оттаивании она превращается в однородный раствор. Prot.K и SDS легко проникают в ядра и лизируют их.

п. 5. и далее.

См. комментарии к "Выделение геномной ДНК из культуры клеток".

Дополнения, комментарии, вопросы

Люди знающие! Здесь недостаёт того, что знаете вы, но не знал или забыл автор. Этой страницей пользуются ваши коллеги. Пожалуйста, поделитесь с ними опытом. Пригодится всё, что поможет в работе.

Chromocenter /12.10.2006 14:31/

Скажите, если выделять ДНК из одного экземпляра мухи, то могут быть сложности? или этого количества материала вполне достаточно? а эти методы подходят для яиц мух или нет?

cordek /27.01.2012 21:15/

Можно и без замораживания азотом выделять, растирая муху в небольшом количестве буфера, а потом доливать остальное.

--- страница форума с комментариями --

Смотри также:
/ссылки на сетевые ресурсы/

-- как прислать био-картинку --

Дата последней модификации: 30/07/13

Zbio-wiki

NG SEQUENCING · ЖИЗНЬ РАСТЕНИЙ · БИОХИМИЯ · ГОРОДСКИЕ КОМАРЫ · А.А.ЛЮБИЩЕВ · ИСТОРИЯ ЗООМУЗЕЯ

· Викимарт - все интернет-магазины в одном месте · Доска объявлений Board.com.ua ·

--- сервер арендован в компании Hetzner Online, Германия ---

--- администрирование сервера: Intervipnet ---

molbiol.ru · redactor@molbiol.ru · реклама