_Павел Егоров_ /11.01.2006 02:06/

Перед окрашиванием гель прокипятить 3 мин. в дистиллированной воде, в микроволновке. Так можно быстро удалить значительное количество SDS из геля, что позволит уменьшить фон и сократить время окрашиывния.

_arwerha_ /11.01.2006 03:39/

БЫСТРЫЙ СПОСОБ ОКРАСКИ!

Главное его преимущество - то, что через час Вы уже сможете узнать о том, что Ваш белок опять не там (или там, если повезло)
Ну, и реактивы без всякого особо ядовитого метанола. Спирт, уксус...

Краситель: 0,22% (масс/об) Кумасси G-250, 40% (об/об) этанол, 8% (об/об) уксусная кислота.

Гель залить красителем, нагреть до появления пара (на горелке или в микроволновке - у кого что есть) , под крышкой оставить минут на 15, после чего краситель слить обратно в колбу (он работает долго без замены). Гель отмывать от фона кипячением в нескольких сменах воды (из-под крана или дистиллята, это не очень принципиально) до исчезновения окраски фона и проявления полос белка.

Alder /11.01.2006 20:25/

спасибо!
только это к другой страничке, где окраска с использованием G-250

_Valery Tarasov_ /11.01.2006 22:37/

Можно все это проделать быстрее и безопаснее

1. 10-15 минут в 10% Укс.к., 40% этанол - фиксация
2. 20 мин. в 0.4% Coomassie Blue R250, 10% Укс.к., 40% этанол - окрашивание
3. 20 мин. в 10% Укс.к. - отмывка (если белка много то и после первых минут видны полосы)

Olori /07.09.2006 21:19/

Вот спасибо!

bkrg /26.10.2006 15:35/

С Кумасси R-250 мы красим так.
За 10 мин. до окончания фореза ставится кастрюлька с водой на плитку. К моменту окончания фореза она закипает. Гель кидается в стакан, заливается раствором следующего состава: этанол - 300мл, вода - 300мл, ледяная уксусная к-та - 60мл, кумасси R250 - 0,7г. Наливать не очень много, но так, чтобы гель свободно болтался в жидкости. Кипятим стакан на водяной бане - 10мин. Краску сливаем (ее можно использовать многократно), ополаскиваем гель в стакане водой, заливаем 7%уксусом (столько же, сколько и краски) и кипятим 3-5 мин. Меняем уксус, снова кипятим. После 3й смены гель гарантированно отмывается. Все делать под тягой. Кипятить с краской обязательно на водяной бане, иначе она будет плеваться во все стороны

curious67 /26.10.2006 15:46/

микроволновка, безусловно, много лучше, если налит немного, то пару минут- и уже все почти кипит, только следить, чтоб гель не скукожился, и будет хорошо

А что, помыть в горячей воде (те использую слово кипяток, ибо риск) перед окрашиванием снижает фон?

Гость /07.11.2007 01:11/

Кто нибудь знает как сделать коричневый раствор кумаси (как в "Bio-Rad Bio Safe Commassie")?

Красится и отмывается без кипячения за 20 мин.

у меня была ссылка на протокал в статье 70х или 80х годов.

Guest /07.11.2007 01:17/

colloidal coomassie - в гугле

Guest /07.11.2007 22:25/

Несколько "заметок на полях"
С G-250 - коллоидный раство получают, постепенно примешивая раствор красителя к 10% ТХУ, получается эдакая смесь цвета хаки. Фон, действительно, слабее, но и чувствительность ниже - потому что окрашиваются белки только на поверхности геля, а не по всей толще, т.к. колллоидный раствор плохо проникает.

Если готовить раствор красителя не с этанолом, а изопропанолом, то SDS диссоциирует быстрее и фиксация происходит лучше. К тому же лучше, чем при стандартной процедуре, окрашиваются гликопротеиды.

А для хорошей отмывки, не распространяя вокруг себя аппетитные пары уксуса с этанолом удобно погрузить белок в отмывочный раство с 10% глицерином - гель сжимается и белеет, при возвращении в нормальную среду восстанавливается в размерах, но фон гораздо ниже (личное наблюдение ).
Убирать краску можно легко, добавляя в отмывочный раствор куски поролона - замечательно экстрагирует кумасси.

Гость /16.01.2009 14:21/

ОЧЕНЬ БЫСТРЫЙ МЕТОД ОКРАШИВАНИЯ (10-15 МИНУТ!!!)

Граждане, все можно сделать еще проще и быстрее. При окрашивании геля Кумасси R-250 довести раствор краски с положенным в него гелем до кипения в микроволновке (это буквально одна минута) и все. Никакая фиксация не нужна, белки фиксируются уже в краске.

Дальше можете уже отмывать в воде при кипении. Налейте в пластиковую коробочку для микроволновки воду (побольше) и доведите до кипения (минуты 3). Кипятить не надо, можно отмыть нужную полосу. Набросайте фильтровальную бумагу (любую, которую не жалко, хоть туалетную) и покачивайте, пока синий фон из геля не перейдет в бумагу. Затем воду смените и процедуру повторите. Все! Окрашивание закончено! На все-про-все - 10-15 минут!

Если хотите удалить из геля SDS (чтобы раствор краски после использования можно было хранить и использовать бесконечно долго), вместо обычной процедуры фиксации, наверное, можно попробовать кипятить гель в воде до окрашивания, как предлагалось выше. Никогда не пробовала, однако, метод кажется вполне разумным.

metrim /25.01.2016 12:21/

Можно ли в рецептуре метанол заменить этанолом?

R.J.Dio /25.01.2016 12:55/

так и надо, жить спокойнее и проще, результат тот же

metrim /26.01.2016 01:45/

Ну просто в хроматографии и методах мокрой химии этанол и метанол - далеко не одно и то же, так что не хотелось бы на собственной шкуре шишки набивать
НУ раз "все юзают этанол", а ето в отличии от метанола у меня практически неограничено, бум его лить

R.J.Dio /26.01.2016 12:18/

лить и пить!