Слабо чувствительный метод (по сравнению с окрашиванием кумасси R-250, серебряным или Zn/имидазолом). Однако он: (i) очень быстр; (ii) гель именно "проявляется", то есть читать можно в процессе окрашивания, а не отмывки; (iii) гель можно высушить и сохранить.
поместить гель в Fixing solution на 5-10' (лучше с покачиванием);
перенести гель в Staining solution, в свежем растворе инкубировать при покачивании минут 5-10;
отмывать гель в обычной воде: кипятить, греть, покачивать - пока не удовлетворитесь результатом;
Fixing solution (хранить при NT в плотно закрытой посуде)
Perchloric acid
4%
Ethanol
50%
Staining solution (хранить при NT в плотно закрытой посуде)
Coomassie G-250
0.1-0.5 %
Perchloric acid
4 %
сначала растворяется в воде краска, затем добавляется кислота; обязательно профильтровать!
Комментарии
Общие
Работать с растворами, содержащими перхлорную кислоту желательно под тягой!
Это модифицированный метод из статьи Reisner A.H., Nemes P., Bucholtz C. 1975. Anal.Biochem. 99:474-476, использующийся в Институте белка РАН.
При аккуратном использовании и свежих растворах метод позволяет читать гель уже минут через 30 после окончания электрофореза, что существенно короче, чем время, предлагаемое стандартным методом с использованием уксусной кислоты-метанола.
По пунктам
п. 1.
Время инкубации зависит от степени свежести раствора. Индикатором того, что пора вынимать гель, может служить пожелтение фронта бром-фенолового красителя.
п. 2.
По мере старения раствора (его цвет при этом будет меняться с коричневого на буро-синий) время инкубации будет расти. Чтобы сократить это время, можно слегка подогревать раствор (кипятить не желательно - улетает кислота, и раствор быстро портится).
MolBiol.ru >
Методы >
Белки > Окрашивание гелей Кумасси G-250
Zbio-wiki
Дополнить