Заранее (в предыдущий день) приготовить
- среду 2xYT из расчёта 22ml на одну плашку;
- стерильный (автоклавированный) шланг (Mediumschlauch lang 1.8-2.0m);
- 70% спирт ~400 ml;
- стерильные Watman 3MM paper для промакивания влаги с чашек;
Подготовка к работе
ВНИМАНИЕ!!! Работать только в перчатках, не забывать время от времени протирать их 70% спиртом.
- протереть 70% EtOH:
* направляющие,
* подъемный столик,
* оргстеклянный держатель шланга,
* внутренние поверхности приемной и подающей колонн,
* стол перед прибором;
- вымыть детергентом, сполоснуть водой, а затем хорошо протереть фильтровалкой с внешней стороны:
* держатель для плашек (PS 384),
* ванночки (пустая и "Medium");
- включить прибор:
* выключатель на колонне,
* компьютер "power";
- при загрузке компьютера выбирать "default", а затем загрузить Windows: "win";
- на приборе установить: "Enter" => "manual konfiguriren";
- сменить типы
* команда "spitzenwechsel",
* старые типы уложить в специальную коробочку в правом ящике под прибором,
* держатель типов вымыть детергентом, сполоснуть водой, затем 70% EtOH, протереть,
* новые типы: промыть 70% EtOH снаружи и стряхнуть,
* установить в IGEL;
- установить ванночки и подставку (для перемещения направляющих пользоваться стрелками с левой стороны панели):
| Позиция: | Ванночка: |
| 1 | подставка PS384 (среда)или PP384 (PCR продукты) в зависимости от задачи |
| 2 | ванночка пустая |
| 3 | ванночка "Medium" |
| 4 | ничего |
|
- дважды провести промывку типов 70%EtOH, один раз - стерильной H2O (сам прибор повторяет промывку 3 раза):
* залить в ванночку >2/3 70% EtOH (или H2O),
* поднять ванну до уровня игл пользуясь стрелками вверх/вниз (Внимание!!! Это совсем не просто, лучше выполнять подъём в несколько приёмов; при промывке можно чуть-чуть приподнимать/опускать ванну руками),
* команда "Spulen",
* промокнуть иглы стерильным Whatman 3MM;
- вернуться в "Manual configuriren" через "Verlassen";
- установить банку со средой и шланг: на банку со шлангом сверху положена крышка, все обернуть фольгой;
- переключить на "Sensor 2";
- уложить плашки (стороной со срезом направо):
- подающая колонна {A} 15-20шт. (крышка только на верхней!),
- в левую колонну правого блока - одну закрытую (или только крышку), чтобы ванна по возможности перемещалась под "крышами",
Внимание!!! нельзя позволять прибору работать с закрытой чашкой, он забирает ее из подающей колонны вместе с крышкой;
- запустить программу:
* открыть "OPAL JENA",
* открыть файл с программой :
"Datei"
C: \IGEL_NEW\FILL_40.IGL => заполнены чашки 40µl среды
C: \IGEL_NEW\FILL_50.IGL => заполнены чашки 50µl среды
C: \IGEL_NEW\PP2PS400. IGL - перенос PCR продуктов,
- F5 - старт программы,
если при старте насос в первый раз не успеет набрать полную ванночку => ответить "Nein", запустить программу еще раз;
- Не класть крышку на последнюю чашку!!!
Во время работы
- следить за чистотой донышек плашек, т.к. они устанавливаются друг на друга без крышек (при выкладывании на стол можно использовать Saran Wrap или внутреннюю поверхность пакетов от 384-плашек);
- не позволять накапливаться >15 плашек в приемной колонне (говорят, что иначе они могут соскочить вниз);
- следить, чтобы на верхней чашке была крышка (можно установить заранее);
- лучше, если максимально возможное время прибор работает за закрытым передним стеклом;
- прервать работу прибора можно, убрав плашку из подающей колонны, для нового запуска - установить плашки, нажать "Wiederholen";
После окончания работы
- трижды промыть шланг ddH2O с помощью перистальтического насоса (приёмный конец - в банку с водой, подающий - в пустой стакан, несколько раз запустить программу);
- вымыть ванночки;
- протереть прибор 70% спиртом;
- положить первую и последнюю чашки на контроль "пророста" 37oС, ON (это минимальное время, после ON нужно оставить еще на ~ 48 h);
- остальные чашки убрать в холодную комнату (можно хранить 4-5 суток).
MolBiol.ru >
Методы >
Макро-методы > Использование IGEL
Zbio-wiki
Дополнить
Если для разлива PCR-mix использовать шланг от среды, то PCR потом не идёт (по крайней мере, так говорят).